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VB12 发酵液含量检测过程中常见问题的 解决方案 1.项目基本情况 1.1 项目由来 我在进入湖南鸿鹰生物科技有限公司实习后，9 月份申请调岗到 发酵一车间液相部门，在部门主任和同事们的共同努力下，多次实践 操作液相检测实验，并且对液相检测过程中常见问题进行分析并提出 解决方案。现介绍液相检测发酵液单位测定操作过程中常见问题的解 决方案。 1.2VB12 发酵过程 在一群菌株里筛选可培养的菌株，用玻璃珠打碎过滤稀释之后划 平皿然后放进培养箱培养，制作成摇瓶去测效价。将高效价的菌种做 成甘油管进行保存。再从甘油管里面挑选几个菌株移植到一代斜面扩 大培养，再从一代斜面挑选菌株放入二代斜面继续扩大培养，培养完 成后再移到母瓶使菌种进行繁殖，一定时间后移入种子罐培养。等一 定条件后再移到发酵罐，因为发酵生产过程中需要控制指标，所以我 们会取发酵罐中液体用液相方法进行检测（下附工艺流程图）。 图 1 工艺流程图 2 1.3 常见操作仪器设备 我们在进行液相检测发酵液操作过程中会用到一些相关仪器设 备帮助我们完成实验，现将这些设备信息整理如下（表一）。 表一 常见仪器设备 设备名称 型号规格 制造商 LC-100 液相色 Classical3 博纳检测认证有限公司 谱仪 100 电子万用电炉 天津市泰斯特仪器有限 公司 超声波仪 KQ-3200B 昆山美美超声仪器有限 公司 电子天平 JY202 上海浦春计量仪器有限 公司 无油真空泵 HX_01 天津华鑫仪器有限公司 图一 LC-100 液相色谱仪 图二 电子万用电炉 3 图三 超声波仪 图四 电子天平 图五 无油真空泵 3.检测准备 3.1 流动相溶液的配置 先量取280mL 甲醇倒入1000mL 量筒中；然后加入纯化水定容至 量筒刻度线，再用有机系滤膜（0.22 μ m 规格）将28%甲醇进行过滤； 接着用该液体润洗一遍玻璃瓶再装瓶；最后超声定时10min 即配置成 功。 3.2 标准溶液的配置 标准品储蓄液：先准备一个已标定的100mL 容量瓶，使用电子天 平准确称取维生素B12 标准品0.1g，然后加适量25%乙醇使溶解，再 定容至刻度线，摇匀盖塞作为标准品储蓄液。再用2mL 移液管吸取标 准品储蓄液于另一个已标定好的100mL 容量瓶中，接着加纯化水最后 4 定容至刻度线摇匀，维生素B13 发酵液标准溶液即配置成功（保存温 度4℃常温冰箱）。 3.3 色谱条件 C18 色谱柱:4.6x250mm，Sum，检测波长361nm, 流动相:28%甲 醇 (甲醇:水=28:72)，流速0.8mL/min,C18 色谱柱柱温:38+2℃。 5.检测方法 5.1 准备工作 将电脑和色谱工作站打开，电脑上打开伍丰液相，流动