2022年神经通路追踪技术2.pptxVIP

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整理ppt 1 神经通路追踪技术 CIVD — HBQF — Z1229 这是第1页 整理ppt 2 什么是神经通路? 神经通路是从感受器到大脑皮质或从大脑皮质至效应器的神经元链,作为神经冲动传导的通路,称神经通路; 神经传 感觉传导通路(上行传导通路):从感受 导通路 器到大脑皮质的神经元链; 运动传导道(下行传导通路):从大脑皮 皮质到效应器的神经元链; CIVD — HBQF — Z1229 这是第2页 整理ppt 3 CIVD — HBQF — Z1229 这是第3页 整理ppt 4 那么,传导速度这样快,科学家们是通过什么技术来争论的呢? CIVD — HBQF — Z1229 这是第4页 整理ppt 5 争论一般思路 给与神经元以某种物质,追踪它的输送及其输送后在神经元其它部分的定位; 应用一些组织化学方法来显示中枢神经通路---如荧光法; CIVD — HBQF — Z1229 这是第5页 整理ppt 6 神经通路追踪技术 凡是用于争论神经系统各结构间的纤维联系方法统称为神经通路追踪技术;例如: Golgi染色法 辣根过氧化物酶轴突逆行追踪法  荧光色素逆行标志法  放射性核素示踪法  细胞毒植物凝集素追踪法 ...... CIVD — HBQF — Z1229 这是第6页 整理ppt 7 Golgi染色法 方法:将动物灌注固定后取脑并将全脑浸于Golgi染液中2周,然后浸于30%蔗糖中;经过蒸馏水洗涤,氨化,酸性坚膜定影液反应,蒸馏水再洗涤,然后切片,接受100微米厚的震惊切片;经上升梯度酒精脱水,透亮,裱片后观看; 目的:争论神经元之间的邻近关系以及树突,轴突的配布; CIVD — HBQF — Z1229 这是第7页 整理ppt 8 CIVD — HBQF — Z1229 这是第8页 整理ppt 9 辣根过氧化物酶轴突逆行追踪法(Horseradish peroxidease-HRP) 辣根过氧化物酶轴突逆行追踪法是利用轴浆运输现象追踪神经元间联系的一种方法; 轴浆运输是神经元的一项基本活动,即沿其轴突从胞体向末梢(顺向)及从末梢向胞体(逆向)的物质运输; 到达胞体或末梢的HRP,最终通过呈色反应,形成有色反应产物 HRP方法的主要步骤:HRP的引入 存活期 神经材料的固定,取材 切片及组织化学反应 切片的观看 CIVD — HBQF — Z1229 这是第9页 整理ppt 10 HRP法的基本用法: ①识别突触传入冲动的来源 将HRP注入轴突终末某区,它即被摄取,并经轴突逆行送到神经胞体,从而追踪突触传入冲动的来源和去处; ②确定传出投射 注射HRP到灰质区,可使注射区的神经元胞体摄取示踪剂并经轴索顺行输送到突触终末; ③神经元的Golgi样染色; CIVD — HBQF — Z1229 这是第10页 整理ppt 11 Methods rely on a substance’s incorporation into the neuron, its transport, and its subsequent localization in other part of the neuron; Histochemical methods. CIVD — HBQF — Z1229 这是第11页 整理ppt 12 留意事项 给药 加压注射,离子投入和轴索损耗后标记; 动物存活时间 逆行输送速度:50-120mm/天,胞体内活性:2-4天; 顺行输送速度:100-300mm/天; 固定和切片 1%多聚甲醛于1.5戊二醛,一般为冰冻切片; HRP的选择 游离HRP; 结合HRP(氨基酸,凝集素,某些细菌毒素等可提高其灵敏度数十倍); CIVD — HBQF — Z1229 这是第12页 整理ppt 13 常用的成色方法及成色剂 成色剂显示HRP----组织化学反应步骤 成色方法: 是将组织培育于H2O2和成色剂(联苯胺或其衍生物)溶液内,由过氧化物---过氧化物酶系统氧化成有色产物; 成色剂: 二盐酸联苯胺四盐酸(DAB); 联苯胺二盐

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