食品微生物检验技术-广西职业技术学院3.pptVIP

2. 試管前端過火 3. 打開試管蓋 无菌操作 – 取菌技巧 1 4. 試管傾斜，放入接種環 無菌操作 – 取菌技巧 1 5. 試管前端過火，蓋上試管蓋 6. 接種環燒紅滅菌 无菌操作 – 取菌技巧 1 5. 試管前端過火，蓋上試管蓋 6. 接種環燒紅滅菌 无菌操作 – 取菌技巧 1 2. 自 Plate 上取單一菌落 (方法一：蓋子微開遮住培養基，避免空氣中菌體掉入) (方法二：plate 反面拿起) 无菌操作 – 取菌技巧 2 1. 擠出安全吸球內空氣，插上滅過菌之玻璃吸管 2. 向上為吸，向下為放 无菌操作 – 取菌技巧 3 1. 調整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取範圍 200 ~ 1000μl) 2. 插上滅過菌之 Tip (用力插緊) 无菌操作 – 取菌技巧 4 3. 按鈕壓至第一段 (不可壓至最底) 4. 深入液面下 2 ~ 4 mm 无菌操作 – 取菌技巧 4 5. 慢慢釋放按鈕，即可 吸取液體 无菌操作 – 取菌技巧 4 1. 試管前端過火 2. 打開試管蓋 无菌操作 – 接菌技巧 方法一：以接種環沾菌，放入新的培養基中接菌 方法三：以Pipetman 吸取菌液，按鈕壓至最底排出菌液 方法二：以安全吸球吸取菌液，放入新的培養基中，向下排出菌液 无菌操作 – 接菌技巧 操作時離火源遙遠 試管直放，空氣中菌體容易掉入 無菌操作 – 錯誤示範 4、培养基pH的校正 　 灭菌后PH值会下降0.1～0.2，在做培养基校正PH值时，应比实际值高0.1～0.2； PH调整后，还应将培养基煮沸。 5、培养基的过滤澄清 　液体培养基可用滤纸过滤法 琼脂培养基,可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤 ６、培养基的分装 　　　斜面： 1/５管 半固体培养基：1/3管 高层斜面：1/4～1/3管 平板：13~15ml 7、培养基的灭菌 （1）含糖类或明胶的培养基： 113℃灭菌15分钟或115℃灭菌10分钟。 （2）无糖培养基： 121℃灭菌15~20分钟。 （3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取后再加入冷却至约50℃左右的培养基中。 （4）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至55℃-60℃时取出，再摆置成适当斜面。 8、培养基的质量测试 （１）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。 （２）将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。 （３）用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24～48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。　　 9、培养基的保存 （1）基础培养基不能超过两周 （2）生化试验培养基不宜超过一周， （3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过3天。 思考题 1、加入培养基中的抑制剂有什么作用，常用的抑制剂有哪些？ 2、在制备培养基时，将各成份溶化时要注意哪些问题？ 3、在制备培养基时，如何进行培养基pH的初步调正？ 4、如何选择培养基的灭菌条件？ 5、如何进行培养基的保存？ 培养基配制 – 器材 培养基、玻璃器皿天平秤、药匙 培養基配製 – 儀器 杀菌锅 (Autoclave) 无菌操作台 (Laminar flow) 培养基的配制 – 装水 以量桶裝取適當量蒸馏水於玻璃容器中 於玻璃容器上标示培养基名称 培養基配製 – 秤藥 放上秤藥紙並歸零 以秤藥匙舀出適當量培養基 (請看培養基罐上說明) 培養基配製 – 溶解培養基 傾倒培養基時小心不要沾到玻璃壁上 注意事項 – 配藥結束 清理配藥桌面與天平 清洗秤藥匙，擦乾放回 藥品放回藥品櫃 培養基配製 – 分裝 調整分注器 (Dispensette) 刻度 分裝試管 蓋上試管蓋 放入杀菌锅 (Autoclave) 灭菌 培養基配製 – 灭菌 加水蓋過鐵板 放東西 關門 調整溫度時間 關緊洩壓閥 注意事項 – 杀菌锅的使用 注意事項 – 殺菌釜使用 滅菌結束後，等壓力降回零時才可打開門 進入殺菌釜 之物品，蓋子不可關太緊或太鬆 注意事項 – 殺菌釜使用 拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套 培養基配製 – 平板培養基 滅過菌之固態培養基於無菌操作台 (Laminar flow)內倒製平板培養基 (Plate) 日光燈 UV燈 風扇 第二节、微生物检验的基本操作技术 主要内容 无菌技术 M的接种与分离技术 微生物的培养方法 微生物的生长现象与观察 一、无菌技术 （一）什么