细胞工程之种质保存技术.pptVIP

培养材料包埋后，避免了其裸露时可能受到的损伤，使材料所处的环境更为恒定 优点 1易于操作 2避免使用DMSO 3免去了程序降温仪的使用，降温过程比较随意 4可用较大的培养材料 第五十六页，共八十页。 无论是就地保存还是建立植物园和苗圃，均会耗费大量的土地以及人力物力 还有可能受病虫害及其他自然灾害的影响使植物种质遭受损失 种子贮存是最常用的种质保存方法 第二十四页，共八十页。 在一定范围内，种子的湿度每降低1%，保存时间翻番；同样，保存温度每降低5 ℃，种子生命活性保持也能倍增 基于这样的研究，种子库的湿度一直低于10%，而温度则维持在零下20 ℃。 保存条件 第二十五页，共八十页。 一般情况下，种子库的植物种子在湿度小于10%和零下20℃的条件下至少能保持10年内仍充满活性。 每过10年，科研人员就会对种子进行发芽抽样测试，以确保它们仍具有生命力，如果效果不好，就立即更换一批。 第二十六页，共八十页。 理论上讲，种子的最长保存期可以达到200年。 英国皇家植物园的生物学家在2006年成功地在实验室条件下将200多年前、英王乔治三世时期（1803年）保留下来的一些槐树种子培育发芽，创造了搁放时间最久还能生长发育的植物种子的纪录。? 第二十七页，共八十页。 1.对于寿命短的种子，每隔几年就得繁殖一次，成本较高 2.某些种子干燥时会失去活力或受到损伤 3.对于长寿树种，可能会有很多年不结种子 4.很多植物通过无性繁殖繁衍后代，没有种子 对于上述植物可通过离体保存技术来长期保存 种子保存的困难 第二十八页，共八十页。 离体培养的植物细胞、组织、器官和试管苗等 保存于人工环境下，一般是在低温或超低温条件下，抑制其生长，达到长期保存的目的 植物离体保存 in vitro preservation 第二十九页，共八十页。 节约大量土地、人力物力，节省费用 种质不受病虫害侵染，便于种质交流 保存的种质一旦需要，可迅速通过组织培养技术进行快速繁殖，有利于种质的利用和推广 离体保存技术的优点 第三十页，共八十页。 超低温冷冻保存技术 低温保存技术 常温保存技术 离体保存的类型 第三十一页，共八十页。 基本原理：将植物材料加入一定的冷冻防护剂，再经一定的方法处理后，贮存在-80℃（干冰温度）至-196℃（液氮温度）的超低温条件下 所用的植物材料 离体培养的原生质体、细胞、组织、器官、小植株 植物的花粉、蕨类植物或海藻的孢子等 一、超低温冷冻保存 第三十二页，共八十页。 -196 ℃的超低温条件下，细胞内的物质代谢及生命活动处于几乎完全停止的状态，遗传变异也降到最低。理论上植物材料放在液氮中可以无限期贮存。 第三十三页，共八十页。 植物细胞中含有大量的水分，约占细胞总重量的60～90％。 细胞中的水是由游离水和束缚水组成，其中游离水约占90％，很容易冻结。 种质超低温保存成功的关键，在于降温冰冻过程中避免细胞内结冰 细胞内外水的冻结状态是关键 第三十四页，共八十页。 超低温保存有三个重要操作步骤： 预冻 在-196oC下长期贮存 解冻 第三十五页，共八十页。 超低温保存植物种质资源的程序 第三十六页，共八十页。 细胞质浓厚的分生细胞 处于旺盛的对数分裂期的细胞 常选择细胞培养物、植物茎尖、幼胚、幼苗等作为冷冻保存的材料 1.植物材料的选择 第三十七页，共八十页。 注意事项 1 培养代数过多，可能会使细胞失去再生能力 2 培养时间过长会使细胞液泡化 3 长期培养的愈伤组织和细胞在遗传上容易变异 选择培养代数低的材料 结构紧密的细胞团与愈伤组织要比单个细胞及松散的细胞团更耐受冷冻 细胞或愈伤组织保存 第三十八页，共八十页。 野外生长的材料 选择经过冬天低温锻炼过的植株 来自于抗寒植物的材料，其抗冻性较一般植株强 第三十九页，共八十页。 在冷冻之前对细胞进行预处理，可改善细胞的抗寒能力，从而提高细胞冷冻处理后的存活率 常用方法 低温 培养基加入渗透剂、DMSO 脱水处理 2.预处理 第四十页，共八十页。 通常将材料放在0℃左右处理数天至数周 对于低温敏感的植物材料尤为重要 康乃馨无性系在4℃培养3天后进行超低温保存，解冻后茎尖存活率较未进行预处理的材料明显提高 2.1低温预处理 第四十一页，共八十页。 渗透剂：甘露醇、山梨醇、蔗糖、脯氨酸等 脯氨酸是植物体内天然的防护剂 使细胞的体积降低，提高材料的抗冻性，增加冷冻后的存活率 2.2培养基加入渗透剂 第四十二页，共八十页。 将细胞脱水到适当程度，可大大提高材料冷冻及解冻后的存活率 而且含水量低的材料，对解冻速度的要求更为宽松 2.3脱水处理 第四十三页，共八十页。 降低冰点，促进过冷却和玻璃态化的形成； 提高溶液的黏滞性，阻止冰晶形成； DMSO可以使膜物质分子重新分布，增加细