王金发《细胞生物学》课件第2章.pptVIP

CHAPTER 2 Experimental Approaches for Studying Cells 第一页，共三十七页。 百度文库不能分享？ 不知道为什么百度文库不能分享，那就不上传了。 第二页，共三十七页。 OUTLINE 2.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY 2.2 TECHNIQUES OF CYTOCHEMISTRY 2.3 TECHNIQUES OF CELL SORTING 2.4 CELL ENGINEERING 2.5 TECHNIQUES OF ISOLATION 2.6 METHODS OF MOLECULAR BIOLOGY 第三页，共三十七页。 普通光学显微镜 第四页，共三十七页。 2.1 TECHNIQUES OF MICROSCOPY 2.1.1 The Light Microscope ?Resolving power,R ?显微镜的数值孔径 (numeric aperture，NA) ? 放大率(magnification,M) 第五页，共三十七页。 波长与分辨率 第六页，共三十七页。 2.1.2 光镜标本制备技术 ? 细胞染色技术 ? 组织固定和切片技术 ? 细胞化学技术 利用 Feulgen反应可特异性检测细胞中DNA。 2.1.3 常用光学显微镜 ◆普通双筒显微镜 (binoular microscope) ◆荧光显微镜 (fluorescence microscope) ◆相差显微镜 (phase contrast microscope) 第七页，共三十七页。 2.1.3 常用光学显微镜 ◆倒置显微镜 ■物镜与照明系统的位置颠倒。 ■集光器与载物台之间的工作距离提高,可以放置培养皿、培养瓶等容器,直接对培养的细胞进行照明和观察。 第八页，共三十七页。 倒置显微镜 第九页，共三十七页。 2.2 电子显微镜 (Electron microscope) 1932年德国学者Max Knolls和Ernst Ruska用波长比光短得多的电子作光源,发明了第一台电子显微镜，大大提高了显微镜的分辨率，开拓了超微世界。 第十页，共三十七页。 2.2.1 电子显微镜概述 ?电子显微镜的基本结构 电子显微镜基本结构由三大部分组成: ●电子光学系统由照明系统、标本室、 成像系统、观察窗和记录用的照相机等 组成； ●真空系统是保持电镜的真空度； ●电子学系统即供电系统，需要高压稳压。 第十一页，共三十七页。 电子染色 标本对电子的散射能力取决于其组成 元素的原子序数,原子序数越高,散射的电 子越多,反差就越大。生物分子是由一些原 子序数很低的轻元素(氢、氧、碳、氮等) 组成的,它们散射电子的能力很弱,在电镜 下几乎不存在明暗反差。为使生物样品加 大反差,就要进行染色,即用重金属增加电 子散射能力,称为电子染色。 第十二页，共三十七页。 电镜样品的制备 第十三页，共三十七页。 2.2.2 Transmission Electron Microscope ◆冰冻蚀刻术(freeze-etching) 是专门观察样品外表面的投影 复型术。 第十四页，共三十七页。 冰冻蚀刻技术 第十五页，共三十七页。 2.2.3 Scanning Electron Microscope 原理： 目前一般扫描电镜的分辨率约60～100 ?(6～10nm)。 2.2.4 Scanning Tunneling Microscope,STM ◆基本原理 2.2.4 扫描隧道显微镜 ?扫描隧道显微术在生命科学中的应用 ◆DNA结构研究； ◆胶原、纤维和蛋白质结构研究； ◆细胞膜表面结构的研究。 第十六页，共三十七页。 扫描隧道显微镜工作原理 第十七页，共三十七页。 扫描隧道电镜下的DNA双螺旋 第十八页，共三十七页。 2.3 TECHNIQUES OF  CYTOCHEMISTRY 2.3.1 酶细胞化学技术 酶细胞化学技术就是通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位。 2.3.2 免疫细胞化学技术 ? 免疫荧光技术 ? 免疫电镜技术 第十九页，共三十七页。 2.4 Radioautography 放射自显影的原理是利用放射性同位素所发射出来的带电离子(α或β离子)作用于感光材料的卤化银晶体,从而产生潜影。这种潜影可用显影液显示,成为可见的“像”。因此,它是利用卤化银乳胶现象,检查和测量