食品分析PPT课件.pptVIP

硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素（噻嘧色素），在紫外线下，硫色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其他物质干扰时，此荧光强度与硫色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。从而测定其含量。 原理 * 制样→水解→净化→氧化→ 干燥→测定→结果计算 分析步骤 * 2）绘制标准曲线 标准和内标物进行色谱分析，以维生素A峰面积与内标物峰面积之比为纵坐标，维生素A浓度为横坐标绘制标准曲线。 * 高效液相色谱分析 预柱: ultrasphere ODS 10μm, 4mm×4.5cm 分析柱:ultrasphere ODS 5μm, 4.6mm×25cm 流动相: 甲醇:水＝98:2 混匀,于临用前脱气 紫外检测器波长：300nm 进样量：20μL 流速：1.7mL/min * 注意事项 （1）维生素A极易被破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。 （2）在皂化过程中，应每5分钟摇一下皂化瓶，使样品皂化完全。 （3）提取过程中，振摇不应太剧烈，避免溶液乳化而不易分层。 （4）洗涤时，最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加。 （5）无水硫酸钠如有结块，应烘干后使用。 （6）在旋转蒸发时乙醚溶液不应蒸干，以免被测样品含量损失。 （7）用高纯氮吹干时，氮气不能开的太大，避免样品吹出瓶外结果偏低。 * 二、比色法测定VA的含量 GB/T 5009.82—2003中第二法原理 在氯仿溶液中，VA与三氯化锑可生成蓝色可溶性络合物，在 620 nm 波长处有最大吸收峰，其吸光度与VA的含量在一定的范围内成正比，故可比色测定。 * 三、β-胡萝卜素的测定 （GB/T 5009.83—2003 ）第一方法是HPLC； 第二方法为纸层析法。 胡萝卜素是一种广泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多种异构体和衍生物，总称为类胡萝卜素，其中在分子结构中含有β-紫罗宁残基的类胡萝卜素，在人体内可转变为维生素A，故称为维生素A原。如α、β、γ胡萝卜素，其中以β-胡萝卜素效价最高。 * 胡萝卜素原只存在于植物性食品中，但以胡萝卜为食物的家禽、兽类、水产动物及其加工产品，以及为着色而添加胡萝卜素的食品也含有胡萝卜素。 β-胡萝卜素的结构如下： * 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂溶性维生素，故可用有机溶剂从食物中提取。 胡萝卜素本身是一种色素，在450 nm 波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取 β-胡萝卜素时，这些色素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将胡萝卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。 * 净化用层析介质采用氧化镁、氧化铝 避光 洗脱液 样品 填充物 分部收集 玻璃柱 * 四、维生素D的测定 维生素D为固醇类衍生物，具抗佝偻病作用，其中最重要的是D2和D3。植物不含维生素D，但维生素D原在动、植物体内都存在。植物中的麦角醇为维生素D2原，经紫外照射后可转变为维生素D2，又名麦角钙化醇；人和动物皮下含的7-脱氢胆固醇为维生素D3原，在紫外照射后转变成维生素D3，又名胆钙化醇。以D3为最重要。 * 分析方法中较好的是比色法和高效液相色谱法。是AOAC选定的正式方法。 维生素D的结构 * (一)三氯化锑比色法 原理 在三氯甲烷溶液中，维生素D与三氯化锑结合生成一种黄色化合物，呈色强度与维生素D含量呈正比。 * 食品中维生素D含量较低，其他维生素严重干扰其测定，因此测定前必须经柱层析除去干扰成分。层析介质为硅藻土、中性氧化铝。 此法测定的是维生素D2和维生素D3的总量。 * (二) 液相色谱法 灵敏度较比色法高30倍以上，且操作简便，精度高，分析速度快，是目前分析维生素D的最好方法。 试样经皂化后，用苯提取不皂化物，蒸馏除苯，先采用反相C18柱分取维生素D，除去大部分杂质，进一步采用正相色谱分离，紫外检测定量。 * 反相色谱条件 色谱柱：Nucleosil C18,7.5mm*300mm 流动相：乙腈-甲醇（1:1,v/v） 流速：2.0 mL/min 紫外检测波长：254nm 正相色谱条件 色谱柱：正相柱Zorbax SIL,4.5mm*250mm 流动相：0.4%异丙酮的己烷溶液 流速：1.6 mL/min 紫外检测波长：254nm * 注意事项 维生素D2 与维生素D3分不开。 皂化时加入焦性没食子酸作为抗氧化剂。 标样与试样在同样条件下皂化，消除了维生素D的热异化性损失。 也可用硅藻