分离以尿素为氮源的微生物(上课)教材.pptVIP

在实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，这种添加了酸碱指示剂的培养既可以鉴别和分离出能够产生脲酶分解尿素的微生物，称为鉴别培养基。 尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。 15.0g 琼脂糖 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 分离能够分解尿素的选择性培养基成分： 鉴别培养基 酚红 * . 选择培养基 鉴别培养基 * . 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，培养基中将出现红色环带的菌落，说明该细菌能够分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。 * . 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征 * . 显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容 积里样品中微生物的数量。 * . * . * . * . * . . 之后讲课本P22的最上面内容 本实验是训练学生进行微生物实验操作的经典实验，且这一技术常常会用于后续实验中。 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 此实验课题意义何在？ * . 1、尿素 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、脲酶 土壤中的某些细菌能够合成脲酶，并且向胞外分泌。 CO(NH2) 脲酶 + CO2 NH3 + H2O * . 分离以尿素为氮源的微生物 怎么分离出能分解尿素的微生物呢？ 菌种可能在什么环境中较多？ * . 实验室中微生物的筛选原理： 人为提供促进目的菌株生长的条件(包括 营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微 生物生长。 选择性培养基 * . 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 分离能够分解尿素的选择性培养基成分： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 * . 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 培养基选择分解尿素的微生物的原理? * . 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 分离能够分解尿素的选择性培养基成分： 氮源真的唯一吗？ * . 1、琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成 成分，其优点是： ①其主要成分不能被微生物利用； ②可使培养基固化； ③不影响培养基中其他营养物质被微生物吸收。 2、琼脂的成分 琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼脂糖和琼脂果胶，还含有少量的含氮化合物，及其它有机杂质和不溶性杂质。 用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基的固化剂. 尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合 物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素为氮 源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。 15.0g 琼脂糖 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 分离能够分解尿素的选择性培养基成分： 对培养基的灭菌方法？ G6玻璃砂漏斗过滤 * . 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 * . 选择培养基 * . 分离土壤中分解尿素的微生物并计数 ㈠.筛选菌株 ㈢.分离出单个菌落并统计菌落数目 ㈡.设置对照 平板划线法 稀释涂布法 * . 稀释涂布平板法 原理： 将样品进行稀释，在稀释度足够高时， 微生物在固体培养基上能形成单个菌落。 所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成 的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 * . 实验的具体操作 ㈠.土壤取样