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湿热灭菌法 间歇灭菌法 反复几次的常压蒸汽灭菌,以达到杀死微生物营养体和芽孢的目的。 操作步骤:100℃,30-60min;37℃,1h;同上重复三次… 适用于不宜高压灭菌的物质,如糖类明胶牛奶培养基。 方法简单,但却麻烦;工作周期长。 湿热灭菌法 高压蒸汽灭菌法 使用密闭的高压蒸汽灭菌锅,使灭菌锅内蒸汽不外溢,增加压力,由于压力的增高,温度也随之增高,从而提高杀菌力,缩短灭菌时间。 最有效而广泛应用的灭菌方法 实验室常用的是,121℃,15~30min 应用范围 培养基,水,发酵罐等其他不适合干热灭菌的物品。 高压蒸汽灭菌法的注意事项: 完全排除锅内冷空气 灭菌完毕后要缓慢减压 压力降为零后打开盖子 */46 Monod方程 对数期微生物增长: Monod方程: 双基质限制生长动力学: 基质抑制生长动力学: */46 细胞死亡动力学 */46 产物形成动力学 L-P模型: K10, K2=0时,为生长耦联型 K10, K20时,为部分生长耦联型或混合型 K1=0, K20时,为非生长耦联型 */46 发酵过程优化及控制 建立发酵过程模型,实现过程优化控制 描述细胞群体的数学模型 */46 非结构模型 发酵过程参数之间的关系 */46 发酵过程控制 */46 下游处理流程 */46 发酵与产物分离耦联技术 在反应过程中及时将产物或有害物质从反应系统中移出,可以保证生化反应高效进行,简化下游处理 真空发酵:真空减压,易挥发组分分离,只适用于厌氧发酵 气提发酵:氮气、氢气或二氧化碳作为气提载体,将发酵蒸气压大于水的挥发性产物带出,主要用于厌氧发酵 吸附发酵:吸附剂回收产物或副产物,减少抑制 膜分离发酵:膜分离设备与发酵设备耦联,膜生物反应器 萃取发酵:双水相萃取 */46 代谢控制发酵 利用遗传学的方法或其他生物化学方法,人为的在DNA分子水平上改变和控制微生物的代谢,使有用目的产物大量生成和积累 微生物细胞氨基酸、核苷酸的调节机制 */46 酶的生物合成和活性调控 */46 代谢控制发酵的设计思路 改变代谢流 加快速度限制反应 改变分支代谢途径流向 构建代谢旁路 改变能量代谢途径 扩展代谢途径 转移或构建新的代谢途径 */46 2 发酵工程在环境污染治理中的应用 废水生物处理装置实际上可以看作一个大型发酵罐,有机污染物在微生物作用下,转化成CO2和水 废水生物处理技术具体见第6讲 固体废物的堆肥,垃圾的填埋以及废物资源化过程均为发酵过程 固体废弃物生物处理技术具体见第8讲 废物资源化具体见第13讲 */46 固态发酵 又称固体发酵,是指微生物在没有或几乎没有游离水的固体的湿培养基上生长、繁殖、代谢的发酵过程 固态发酵的优缺点 */46 固态发酵生物反应器类型 浅盘式生物反应器 填充床生物反应器 流化床生物反应器 转鼓式生物反应器 搅拌生物反应器 */46 浅盘生物反应器 */46 水平桨混合反应器 */46 堆肥 依靠自然界广泛分布的细菌、真菌等微生物,有控制的促进可被生物降解的有机物向稳定的腐殖质转化的生物化学过程 好氧堆肥:发热阶段(中温微生物),高温阶段(好热纤维素分解菌),降温和腐熟保肥阶段(中温微生物);预处理,一次发酵、二次发酵,后处理 厌氧堆肥:不设通气系统,温度低,腐熟及无害化所需时间较长 */46 污泥堆肥中的微生物相 发酵工程在现代生物技术中的应用 生物技术:应用自然学和工程学的原理,依靠生物作用剂的作用将生物物料进行加工以提供产品和为社会服务的技术。 20世纪70年代以后,以DNA重组技术的建立为标志,形成了一个以基因工程为主导,发酵工程为中心,包括细胞工程和酶工程的现代生物技术体系。 第一节 基因工程菌发酵 一、基因工程技术 通过对核酸分子的插入、拼接和重组而实现遗传物质的重新组合,借助载体将重组的目的基因转移新的宿主细胞体系,并使目的基因在新的宿主体系细胞中进行复制扩增和表达所需的目的产物。 基因工程菌的制备 一、目的基因的制备 1.鸟枪法 选用合适的内切酶,在Mg2+的激活下,切开供体DNA链获得目的基因,根据酶切末端特点分为a、b两类。 基因工程菌的制备 法 又称反转录法,从细胞内提取目的基因的mRNA,在反转录酶的作用下,以mRNA反转录互补的cDNA。 3.人工合成 在电脑控制下
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