蛋白质核酸沉淀分离技术.pptVIP

2、亲和沉淀 利用蛋白质与特定的生物或合成的分子之间高度专一的作用而设计出来的一种特殊选择性的分离技术，其沉淀原理是依据“吸附”有特殊蛋白质的聚合物的溶解度的大小。 原理 引导产生沉淀的方法有： 离子交联 加入带相反电荷的聚合物 加入带相反电荷的疏水基团 改变pH值，诱导产生疏水沉淀 温度诱导产生沉淀 配基-载体复合物与目的蛋白质的分离 基本过程： 亲和结合 洗 涤 初始阶段：将一个目标蛋白质与键合在可溶性载体上的亲和配体络合成沉淀； 所得沉淀物用一种适当的缓冲溶液进行洗涤，洗去可能存在的杂质 用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来 §3.4 核酸的沉淀方法 核酸分离纯化应维持在0-4℃的低温条件下，以防止核酸的变性和降解。 为防止核酸酶引起的水解作用，可加入十二烷基硫酸钠(SDS)、乙二胺四乙酸(EDTA)、8-羟基喹啉、柠檬酸钠等以抑制核酸酶的活性。 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 钙盐沉淀法 溶剂沉淀法 常用的沉淀分离法有： 1、有机溶剂沉淀法 由于核酸都不溶于有机溶剂，所以可在核酸提取液中加入乙醇、异丙醇或2-乙氧基乙醇，使DNA或RNA沉淀下来。 核酸沉淀的形状与其相对分子质量密切相关： 相对分子质量106Da的双链DNA可以丝状纤维缠绕在玻棒上； 相对分子质量稍小的