罗氏试剂盒说明书 Vitamin B12 04761707001_en-t.docVIP

维生素B12检测试剂盒 Vitamin B12 04761707001V4 维生素B12检测试剂盒 Vitamin B12 Elecsys 和 cobas e 分析仪 PAGE 4 / NUMPAGES 7 2010-01, V 7 中文 2007-08，V4中文 PAGE 5 / NUMPAGES 7 Elecsys 和 cobas e 分析仪190 100测试 本试剂盒适用的分析仪 Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601 · · · · 中文 主要用途 体外定量检测人血清或血浆中维生素B12含量。 电化学发光免疫测定法，适用于罗氏Elecsys和cobas e免疫测定分析仪。 临床应用 营养性贫血和巨红细胞性贫血可由维生素B12不足引起。饮食中缺乏肉类和细菌性产物、酒精中毒、对消化和吸收系统的结构/功能的损害（导致恶性贫血）都可导致该元素的缺乏。由胰腺功能缺陷、胃萎缩或胃切除术后肠道破坏、小肠维生素B12结合蛋白（内因子）的缺乏、直接对抗内因子的自身抗体的形成以及相关病因所引起的吸收不良是导致这种元素缺乏的主要原因。1该维生素是正常代谢、DNA合成和红细胞再生所必须。如果任其发展将导致巨幼红细胞性贫血，维生素B12的缺乏还将导致不可逆的中枢神经系统的损害。维生素B12或叶酸是诊断维生素B12或叶酸缺乏的重要指标，在鉴别诊断巨幼红细胞性贫血时尤为重要。在1961年首次报道用放射分析法测定维生素B12。3，4这些方法均利用了57钴放射示踪物标记的维生素B12和结合维生素B12的内因子。多种市售测定法的差异在于游离/结合分离技术和样本预处理的不同。由于存在内源性血清维生素B12结合蛋白（包含R蛋白的钴胺素传递蛋白）和直接对抗内因子的免疫球蛋白，需要在碱性pH条件下煮沸或处理样本从而释放维生素B12并破坏结合蛋白。70年代末，使用血清结合蛋白或部分纯化的内因子的放射分析法检测的维生素B12的水平高于那些采用微生物方法的检测结果。这是由于测定法中含有血清结合蛋白或R蛋白。R蛋白的特异度明显弱于内因子，除了检测维生素B12本身，还检测了维生素B12类似物。5，6，7，8自此推荐在该领域使用高纯度的内因子。Elecsys维生素B12测定法采用竞争法试验原理，使用维生素B12特异性内因子。样本中的维生素B12与加入的生物素标记的维生素B12竞争钌（Ru）a标记的内因子复合物的结合位点。 a)Tris(2,2’-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy){}三联吡啶钌 检测原理 竞争法原理，总检测时间：27分钟 第一次孵育：通过维生素B12预处理1和2与15μL样本一起孵育，释放结合的维生素B12。 第二次孵育：通过将预处理的样本和钌标记的内因子一起孵育，形成一种维生素B12结合蛋白复合物，该复合物的量取决于样本中分析物的浓度。 第三次孵育：添加包被链霉亲和素的磁珠微粒和生物素标记的维生素B12后，钌标记的内因子的空白位点被占据，形成一种钌标记的内因子－维生素B12生物素复合物。该复合物通过生物素和链霉素之间的反应结合到微粒上。 将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。 仪器通过2点定标校正试剂条形码包含的厂商定标曲线，自动计算得到检测结果。 试剂－工作溶液 PT1 预处理试剂1（白盖），1瓶，4mL；二硫苏糖醇1.028g/L；稳定剂，pH5.5。 PT1 预处理试剂2（灰盖），1瓶，4mL；氢氧化钠40g/L；氰化钠2.205g/L。 M 包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml；包被链霉亲和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。 R1 Ru(bpy)32+标记的内因子（灰盖），1瓶，10mL；钌标记的猪内因子4μg/L；双氰钴胺15μg/L；稳定剂；人血清白蛋白；磷酸盐缓冲液，pH 5.5；防腐剂。 R2 生物素标记的维生素B12（黑盖），1瓶，8.5mL；生物素化维生素B12，25μg/L；生物素3μg/L；磷酸盐缓冲液，pH 7.0；防腐剂。 警告和注意事项 仅用于体外诊断。 在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。 所有废弃物必需按照当地法规进行处置。 专业人员可要求获得安全数据报告。 试剂盒所含组分按欧洲指令88/379/EEC分类如下： PT2：C/腐蚀性，R34、S