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高二生物选修 3 重点知识点归纳 高二生物选修 3 重点知识点归纳 基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1. 目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。 2. 原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成 目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3.PCR 技术扩增目的基因 (1)PCR 的含义：是一项在生物体外复制特定 DNA片段的核酸合 成技术。 (2) 目的：获取大量的目的基因 (3) 原理：DNA双链复制 (4) 过程： 第一步：加热至 90 ～95℃DNA解链为单链; 第二步：冷却到 55 ～60℃，引物与两条单链DNA结合; 第三步：加热至 70 ～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行 互补链的合成。 (5) 特点：指数(2n) 形式扩增 第二步：基因表达载体的构建( 核心) 1. 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下 一代 ，使目的基因能够表达和发挥作用。 C A 8 Y 1 I 6 R 7 L 4 2. 组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因 (1) 启动子：是一段有特殊结构的 DNA片段，位于基因的首端， 是 RNA聚合酶识别和结合的. 部位，能驱动基因转录出 mRNA，最终 获得所需的蛋白质。 (2) 终止子：也是一段有特殊结构的 DNA片段，位于基因的尾端。 (3) 标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因， 从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基 因。 第三步：将目的基因导入受体细胞 1. 转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内 维持稳定和表达的过程。 2. 常用的转化方法： 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。方法 的受体细胞多是受精卵。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁 殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠 杆菌，其转化方法是： Z P 2 P 8 O 8 P 3 X 10 先用 Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体 DNA分子溶于缓冲液 中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感 受态细胞吸收 DNA分子，完成转化过程。 3. 重组细胞导入受体细胞后 ，筛选含有基因表达载体受体细胞的 依据是标记基因是否表达。 第 四步：目的基因的检测和表达 1. 首先要检测转基因生物的染色体 DNA上是否插入了目的基因， 方法是采用 DNA分子杂交(DNA-DNA)技术。 2. 其次还要检测 目的基因是否转录出mRNA，方法是采用分子杂 交(DNA-RNA)技术。 H I 1 N 1 R 10 J 3 I 2 C A 8 Y 1 I 6 R 7 L 4 3. 最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是采用抗原—抗体 杂交技术。 4. 有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如生物抗虫或抗病的鉴 定等。 1、蛋白质的基本单位_氨基酸, 其基本组成元素是 C、H、O、N 2 、氨基酸的结构通式：R 肽键：—NH—CO— ︳ NH2—C—COOH ︱ H 3 、肽键数=脱去的水分子数=_氨基酸数—肽链数 4 、多肽分子量=氨基酸分子量 x 氨基酸数—x 水分子数 18 5 、核酸种类 DNA：和 RNA;基本组成元素：C、H、O、N、P 6、DNA的基本组成单位：脱氧核苷酸;RNA的基本组成单位：核 糖核苷酸 Z P 2 P 8 O 8 P 3 X 10 7 、核苷酸的组成包括：1 分子磷酸、1 分子五碳糖、1 分子含氮 碱基。 8 、DNA主要存在于中细胞核，