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果胶酶活性测定 果胶酶 （Pectinase ）是一类复合酶，是指分解果胶物质的多种酶的总称，主 要包括多聚半乳糖醛酸酶 （Polygalacturonase ，PG ）、果胶甲酯酶 （Pectin methylesterase ，PME ）和果胶裂解酶 （Pectinlyase，PL ）等。其中，多聚半乳糖 醛酸酶 （PG ）通过水解作用和反式消去作用，能切断果胶分子中的α-1,4 糖苷键， 将果胶分子降解为小分子物质。PG 每切断一个α-1,4 糖苷键，就会形成一个还原 测 性醛基。通过测定这些还原性醛基生成的量，或果胶分子降解时引起的粘度下降 来测定PG 的活性大小。 检 测定果胶酶活性的方法主要有分比色法、滴定法和粘度降低法等。分光光度 法测定的灵敏度、准确度均高，重现性好，试剂用量少，尤其是操作省时、简便； 质 滴定法测试重现行好，准确度高，但测定时间长，过程较繁琐，试剂用量较大； 粘度降低法测定果胶酶的复合酶活性比较准确，但测定灵敏度不高。在具体测定 液 是，应根据实际需要选择合适的方法。 测 海 I ．比色法检 上 一、目的要求 学习比色法测定果蔬组织中多聚半乳糖醛酸酶活性的原理和方法。 二、基本原理 质 PG 果胶在多聚半乳糖醛酸酶 （ ）作用下，能水解产生带有还原性醛基的半 3,5- 乳糖醛酸。 二硝基水杨酸试剂可与其发生显色反应。根据颜色的深浅程度， 液 PG 可以通过分光光度计测定 活性的大小。 三、材料、仪器及试剂 测 （一）材料 海 柑橘、苹果、香蕉、桃等。 检 上 （二）仪器及用具 25 研钵、高速冷冻离心机、移液器、离心管、分光光度计、具塞刻度试管 （ mL ）、水浴锅、容量瓶。 质 （三）试剂 1．50 mmol/L、pH 5.5 醋酸钠缓冲液 液 A 0.2 mol/L 11.55 mL 1 000 母液 （ 醋酸溶液）：量取 冰醋酸，加蒸馏水稀释至 mL 。 B 0.2 mol/L 16.4 g 27.2 g 母液 （ 醋酸钠溶液）：称取 无水醋酸钠 （或称取 三 海 水合乙酸钠），用蒸馏水溶解、稀释至1 000 mL 。 6.8 mL A 43.2 mL B pH 5.5