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β-葡萄糖苷酶活性测定 β-葡萄糖苷酶 （β-glucosidase ）是纤维素酶的重要组分，存在于许多植物体 中，与植物细胞生长发育过程中细胞壁的松弛或加固有关，还与植物细胞的信号 识别和一些信号分子的产生相联系。β-葡萄糖苷酶不仅具有纤维素的糖化作用， 而且与果蔬中很多特殊物质的代谢有密切关系。在该酶的作用下，能使果蔬中许 多前体物质如甙类、花青苷、键合态挥发性物质中有效成分的释放出来。 测 检I ．水杨苷水解法 一、目的要求 质 β- β- 了解 葡萄糖苷酶的作用，学习水杨苷水解法测定果蔬组织中 葡萄糖苷酶 活性的原理和方法。 液 二、基本原理 β-葡萄糖苷酶可将纤维二糖 （水杨苷为以葡萄糖苷键连接的纤维二糖）水解 测 Salicin 3,5- 成葡萄糖分子。因此，以水杨苷 （又称水杨素， ）为底物，利用 二硝 海 DNS β- 基水杨酸 （ ）法测定 葡萄糖苷酶催化其水解形成的还原糖的量，可以测定 上该酶的催化活性。 检 三、材料、仪器及试剂 （一）材料 质 苹果、梨等。 （二）仪器及用具 恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、试管、移液管或加液器、具塞刻度试 液 25 mL 200 mL 管 （ ）、容量瓶 （ ）、烧杯等。 （三）试剂 海 测 1．50 mmol/L、pH 5.5 醋酸钠缓冲液 A 0.2 mol/L 11.55 mL 1 000 mL 。母液 （ 醋酸溶液）：量取 冰醋酸，加蒸馏水稀释至检 上 B 0.2 mol/L 16.4 g 27.2 g 母液 （ 醋酸钠溶液）：称取 无水醋酸钠 （或称取 三 水合乙酸钠），用蒸馏水溶解、稀释至1 000 mL 。 质 6.8 mL A 43.2 mL B pH 6.0 200 mL 取 母液 和 母液 混合后，调节 至 ，稀释至 。 2 ．提取缓冲液 （含1.8 mol/L NaCl ） 液 10.5 g NaCl 50 mmol/L pH 5.5 100 mL 称取 ，用 、 醋酸钠缓冲液溶解、稀释至 ， 摇匀。 3 ．5