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ACC 氧化酶活性测定 一、目的要求 了解ACC 氧化酶在乙烯生物合成过程中的作用，学习果蔬组织中ACC 氧 化酶活性的测定原理和方法。 二、基本原理 ACC 氧化酶 （ACO ）能催化1-氨基环丙烷-1-羧酸 （ACC ）转化形成乙烯。 测 通过测定ACO 催化产生的乙烯释放量的大小可以反映ACO 的催化能力。 三、材料、仪器及试剂 （一）材料检 梨、苹果、番茄等。 （二）仪器及用具 质 研钵、高速冷冻离心机、移液器、水浴锅、旋涡混合仪、旋转蒸发仪、样品 瓶 （20 mL ，带有密封橡胶塞）、离心管、气相色谱仪、CO 气体。 2 （三）试剂 液 1．100 mmol/L、pH 7.5 Tris-HCl 缓冲液 母液A （0.2 mol/L Tris ）：称取24.2 g 三羟甲基氨基甲烷 （Tris ），溶解、定 海 测 容至1 000 mL 。 母液B （0.2 mol/L HCl ）：取16.67 mL 浓盐酸，加入到蒸馏水中，稀释至1 000 上mL 。 检 取50 mL 母液A ，加入39.9 mL 母液B 混合，待冷却至室温时，调节pH 值 至7.5，再稀释至100 mL 。 质 2 ．提取缓冲液 取 10 mL 甘油，称取 5 g PVP 、77.1 mg DTT 、648 mg 抗坏血酸纳 液 （C H O Na·H O ）和2.78 mg FeSO ·7H O ，用 100 mmol/L 、pH 7.5 Tris-HCl 缓 6 7 6 2 4 2 冲液溶解、并定容至100 mL ，即为提取缓冲液[含10%甘油 （v/v ）、5% PVP 、5.0 测 mmol/L DTT、30 mmol/L 抗坏血酸钠和0.1 mmol/L FeSO ] 。 海 4 3 ．反应缓冲液 取10 mL 甘油，648 mg 抗坏血酸纳 （C H O Na ·H O ）、20.2 mg ACC 和2.78 上 6 7 6 2 检 mg FeSO ·7H O ，溶解到100 mmol/L 、pH 7.5 Tris-HCl 缓冲液中，并定容至100 mL ， 4 2 即为反应缓冲液[含10%甘油 （v/v ）、30 mmol/L 抗坏血酸钠、2.0 mmo/L ACC 和 0.1 mmol/L FeSO ] 。 质 4 四、实验步骤 （一）酶液提取 液 称取5.0 g 果肉组织，加入5.0 mL 提取缓冲液，在冰浴条件下研磨匀浆后于 4 ℃、12 000×g 离心30 min ，收集上清液即为酶粗提液。 （二）酶活性测定