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丙酮酸含量的测定 一、目的要求 学习利用2,4-二硝基苯肼法测定果蔬组织中丙酮酸含量的原理和方法。 二、基本原理 用三氯 乙酸沉淀除去果蔬组织提取液 中蛋 白质后，其 中所含 的丙酮酸 （Pyruvate ）可与 2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯踪。该产物在 碱性溶液中呈樱桃红色，在波长 520 nm 处具有显著光吸收。该反应产物呈色的 测 深浅程度与溶液中丙酮酸含量呈正相关关系。因此，可利用分光光度计法测定果 蔬组织中丙酮酸的含量。 检 三、材料、仪器及试剂 （一）材料 质 各种果蔬组织，大葱、洋葱或大蒜的鳞茎为佳。 （二）仪器及用具 研钵、离心机、电子天平、分光光度计、离心管、试管、容量瓶 （100 mL ）、 液 移液器。 （三）试剂 测 海 1．1.5 mol/L NaOH 2 ．8%三氯乙酸 （当日配制置，贮存于冰箱中备用） 上 3 ．0.1% 2,4-二硝基苯肼 检 称取 100 mg 2,4-二硝基苯肼，溶于 100 mL 2 mol/L HCl 溶液中，贮于棕色试 剂瓶，保存于冰箱内。 质 4 ．丙酮酸标准液 （50 µg/mL ） 精确称取 6.3 mg 丙酮酸钠，溶于蒸馏水中，定容至 l00 mL ，保存于冰箱。 四、实验步骤 液 （一）标准曲线的制作 取 6 支试管，编号，按表 2 1 加入各试剂。 测 海 表 2 1．绘制丙酮酸标准曲线各试剂加入量 项 目 管 号 检 上 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 质 8%三氯乙酸/mL 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 相当于丙酮酸量/μg 0 10 20 30 40 50 1.0 mL 0.1% 2,4- 液 5.0 在上述各管中分别加入 二硝基苯肼溶液，摇匀，再加入 mL 1.5 mol/L NaOH 10 min 0 溶液，摇匀，进行显色反应 。然后以 号试管为空白 参比，在波长 520 nm 处比色测定，以吸光度值为纵坐标，以丙酮酸的量为横坐 海 标，制作标准曲线，求得线性回归方程。 （二）提取