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ACC 合成酶活性的测定 一、目的要求 了解ACC 合成酶在乙烯生物合成过程中的作用，学习果蔬组织中ACC 合 成酶活性的测定原理和方法。 二、基本原理 ACC 合成酶 （ACS ）能催化S-腺苷蛋氨酸 （SAM ）形成 1-氨基环丙烷-1- 测 羧酸 （ACC ）。通过测定ACS 催化形成的ACC 的量，就可以反映ACC 合成酶 活性。 三、材料、仪器及试剂 检 （一）材料 梨、苹果、番茄等。 质 （二）仪器及用具 研钵、高速冷冻离心机、移液器、水浴锅、旋涡混合仪、旋转蒸发仪、样品 瓶 （20 mL ，带有密封橡胶塞）、离心管、气相色谱仪。 液 （三）试剂 1．100 mmol/L、pH 8.0 磷酸钾缓冲液 测 海 母液A （1 mol/L K HP0 ）：称取174.18 g 磷酸氢二钾，用蒸馏水溶解、定容 2 4 上至1 000 mL 。 检 母液B （1 mol/L KH P0 ）：称取136.09 g 磷酸二氢钾，用蒸馏水溶解、定容 2 4 至1 000 mL 。 取94.0 mL 母液A 和6.0 mL 母液B ，混合，调节pH 值至8.0 ，稀释至1 000 质 mL 。 2 ．提取缓冲液 （含1 mmol/L EDTA、1 mmol/L PMSF 、4 mmol/L DTT 、3% 液 PVPP 和10 μmol/L 磷酸吡哆醛）。 称取24.7 mg 磷酸吡哆醛 （MW 247.1），溶解、用100 mmol/L、pH 8.0 磷 测 酸钾缓冲液定容至100 mL ，混匀，即为1 mmol/L 磷酸吡哆醛溶液。 海 称取29.2 mg 乙二胺四乙酸（EDTA ）、17.4 mg 苯甲基磺酰氟（PMSF ）、61.7 mg 二硫苏糖醇 （DTT ）和3 g PVPP ，取1 mL 1 mmol/L 磷酸吡哆醛溶液，加入 上 检 到100 mmol/L、pH 8.0 磷酸钾缓冲液中，定容至100 mL ，混匀，即为提取缓冲 液。3 ．50 mmol/L、pH8.0 HEPES-KOH 缓冲液 质 称取4.77 HEPES （MW 238.31），溶于16 mL 蒸馏水中，用2 mol/L KOH 溶液调节pH 至8.0 ，再稀释至20 mL ，过滤后分装，4℃保存，即为 1 mol/L 液 HEPES-KOH 储备液。 取5.0 mL 1 mol/L HEPES-KOH 储备液，用蒸馏水稀释至100 mL ，混匀，即 为50 mmol/L、pH 8.0 HEPES-KOH 缓冲液。 海 4 ．反应缓冲液 （含250 μmol/L SAM 和10 μmol/L 磷酸吡哆醛）。 称取1.0