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超氧阴离子产生速率的测定 一、目的要求 学习果蔬组织中超氧阴离子产生速率的测定原理和方法。 二、基本原理 超氧阴离子 （O2- ）能与羟胺反应，生成NO2- ，NO2- 能与对氨基苯磺酸和α- 萘胺反应生成粉红色的偶氮染料，该染料在波长530 nm 处具有显著光吸收。因 测 此利用羟胺氧化的方法可以测定果蔬组织中超氧阴离子产生速率。 O2-与羟胺的反应式如下： NH OH + 2O - + H+ → NO - + H O + H O 2 2 2 2 2 2 检 可用KNO 制作标准曲线，以[NO -]浓度乘以2作为[O -]浓度，计算样品中O - 2 2 2 2 产生速率。 质 三、材料、仪器及试剂 （一）材料 苹果、梨、番茄、桃等。 液 （二）仪器及用具 研钵、高速冷冻离心机、移液器、离心管、试管、水浴锅、容量瓶 （100 mL 、 海 测 1 000 mL ）、分光光度计。 上 （三）试剂 检 1．100 mmol/L、pH 7.8磷酸缓冲液 母液A （200 mmol/L Na HPO 溶液）：称取35.61 g Na HPO ·2H O 或53.65 g 2 4 2 4 2 Na HPO ·7H O 或71.64 g Na HPO ·12H O ，用蒸馏水溶解，定容至1 000 mL 。 2 4 2 2 4 2 质 母液B （200 mmol/L NaH PO 溶液）：称取27.6 g NaH PO ·H O 或31.2 g 2 4 2 4 2 NaH PO ·2H O 用蒸馏水溶解，定容至1 000 mL 。 2 4 2 液 取91.5 mL母液A和8.5 mL母液B混合后，调节pH至7.8，然后稀释至200 mL ， 即为100 mmol/L、pH 7.8磷酸缓冲液。 测 2 ．50 mmol/L、pH 7.8磷酸缓冲液 海 3 ．提取缓冲液 （含1 mmol/L EDTA ，0.3% Triton X-100和2% PVP ） 称取29.2 mg EDTA 、2 g PVP ，取0.3 mL Triton X-100 ，加入到50 mmol/L 、 上 检 pH 7.8磷酸缓冲液中，溶解定容至100 mL 、混匀。 3 ．1 mmol/L盐酸羟胺溶液 质 称取7.0 mg盐酸羟胺，用蒸馏水溶解、定容至100 mL 。