丙二醛含量的测定.pdfVIP

丙二醛含量的测定 一、目的要求 了解脂质过氧化作用对果蔬生理代谢的影响，学习果蔬组织中丙二醛含量的 测定方法。 二、基本原理 果蔬组织在后熟衰老过程中，或遭受病害、冷害或其他伤害等逆境胁迫时， 细胞中产生的超氧阴离子自由基和羟基自由基，能诱导膜脂中不饱和脂肪酸发生 过氧化作用，产生脂质自由基。脂质自由基可进一步诱发膜脂的过氧化作用，导 测 致细胞膜透性增加，细胞受到损伤或死亡。丙二醛 （Malondialdehyde ，MDA ） 是膜脂过氧化作用的主要产物之一，通常利用它的含量作为脂质过氧化指标，反 检 映细胞膜脂过氧化的程度。MDA 可以与蛋白质、核酸反应，改变这些大分子的 构型，或使之产生交联反应，从而丧失生物功能。MDA 还可以使纤维素分子间 质 的桥键松弛，或抑制蛋白质的合成。因此，MDA 的积累能对果蔬细胞质膜和细 胞器造成一定的伤害。 在高温、酸性条件下，MDA 能与硫代巴比妥酸 （TBA ）发生反应形成红棕 液 色的三甲基复合物 （3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），该复合物在波长532 nm 处有 最大光吸收。然而，果蔬组织中存在的可溶性糖类物质对MDA －TBA 反应有干 海 测 扰作用。糖与TBA 显色反应产物的最大吸收波长在450 nm ，在532 nm 处也有 光吸收。为消除这种干扰，可用下列经验公式消除由蔗糖引起的误差， 上 检 C (µmol/L) 6.45 × （OD532 －OD600 ）－0.56 ×OD450 质 式中OD 450 、OD 532 、OD 600 分别代表450 nm 、532 nm 、600 nm 波长处的吸 光度值。 液 运用上式可直接求得果蔬组织提取液中的MDA 浓度，进一步计算出果蔬组 织中MDA 的含量。 三、材料、仪器及试剂 测 海 （一）材料 黄瓜、香菜等。 检 上 （二）仪器及用具 研钵、试管、移液器、恒温水浴锅没、离心机、分光光度计、电子天平、离 心管。 质 （三）试剂 1．10%三氯乙酸 （TCA ）。 液 2 ．0.67%硫代巴比妥酸 （TBA ）。 四、实验步骤 海 称取1.0 g 果蔬样品，加入5.0 mL 10% TCA ，研磨匀浆后，于4 ℃、10 000×g 离心20 min ，收集上清液，低温保存备用。 取2.0 mL 上清液 （对照空白管中加入2.0 mL 10% TCA 溶液代替提取液）， 上 加入2.0 mL