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《分子生物学检验技术》课程实验教学大纲 课程代码 课程名称：分子生物学检验技术 适用专业：医学检验技术 课程类别：专业必修课 开课学期：第五学期 实验学时：32 学时 学 分：4.5 一、开课实验室 医学影像与检验学院医学检验实验室 二、课程性质与任务 课程性质：分子生物学检验技术是医学检验技术专业的重要专业课之一。 课程任务：通过对该课程的学习，要求学生掌握分子生物学检验技术的基本内容（概念、术语、原理）、基本方法（PCR、核酸杂交、DNA重组、芯片技术等）以及在临床实验诊断中的应用。对分子诊断学的发展动态有所了解。 三、教学目的与要求 1.掌握分子生物学检验技术常用操作仪器的使用、基本技术操作技能，能较熟练提取各种标本的DNA、RNA并进行检测鉴定；掌握实验结果的分析。 2.熟悉PCR仪的结构、原理与操作。 3.提高分子生物学检验技术实验操作和分析问题的能力，具有初步分子生物学检验的综合分析问题和动手解决问题的能力，培养学生严谨的科学态度和创新意识。 四、考核形式要求 实验考核由两部分组成：（1）实验操作评价成绩，根据每次实验的学习态度和实验操作情况进行综合评价，占实验成绩的60％。（2）实验报告成绩：实验报告总评成绩占实验成绩的40%。 五、实验项目名称与学时分配 序号 实验项目名称 实验 类型 实验 学时 每组 人数 实验要求 （必做或选做） 1 外周血DNA提取 验证 4 12 必做 2 DNA浓度、纯度的测定 验证 4 12 必做 3 RNA的提取与测定 验证 6 12 必做 4 乙型病毒肝炎DNA的定性PCR检测 综合 6 12 必做 5 质粒DNA的提取与酶切分析 验证 8 12 必做 6 临床基因诊断实验室见习 综合 4 10 必做 六、实验项目的具体内容 实验一 外周血DNA提取 1、实验目的和要求 （1）掌握氯仿酚提取外周血提取的原理与要求； （2）熟悉DNA提取的操作与注意事项、DNA提取中各种试剂的作用。 （3）了解DNA提取方法的新进展 2、实验内容或原理 离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。 3、需用的仪器、试剂或材料等 高速（低温）离心机、低速离心机、水浴箱、各种型号的微量加样枪、1.5mlEP管、2.0mlEP管，各种型号吸头、无水酒精、tris-饱和酚、氯仿、戊二醇、EDTA、RNA酶、蛋白酶K，等 4、实验步骤或环节 （1）教师讲解、示教 （2）学生分成一人一组，按照实验步骤进行操作，老师巡回指导与讲解，纠正错误。 （3）小结 5.教学方式 老师讲解、示教 + 学生操作，老师指导 6、考核要求 在学生实验过程中检查操作的准确性并纠正操作中的错误、分析原因。 7、实验报告要求 要求书写实验目的、实验原理、实验器材、实验步骤、实验结果、注意事项、实验体会或分析、等。 实验二 DNA浓度、纯度的测定 1、实验目的和要求 （1）掌握DNA浓度、纯度和完整性测定的原理和方法； （2）熟悉影响DNA浓度、纯度和完整性因素；DNA浓度、纯度和完整性测定的操作。 （3）了解DNA测定的其他方法 2、实验内容或原理 （1）、在250~270nm处核酸分子中的碱基有最大吸收.260nm下，吸光值等于1时相当于50μg/ml的dsDNA，40μg/ml的ssDNA或RNA，33μg/ml的寡核苷酸。 （2）、主要通过A260与A280的比值来判定有无蛋白质等的污染。比值升高或降低均提示制备的核酸纯度不佳。 （3）、以EB为示踪剂的核酸凝胶电泳可判定核酸制品的完整性，基因组DNA如果发生降解，电泳图呈拖尾状。 3、需用的仪器、试剂或材料等 各种型号的微量加样枪、1.5mlEP管、2.0mlEP管，各种型号吸头、电泳槽、电泳仪、核酸染料、紫外分光光度计，等 4、实验步骤或环节 （1）教师讲解、示教 （2）学生分成一人一组，按照实验步骤进行操作，老师巡回指导与讲解，纠正错误。 （3）小结 5.教学方式 老师讲解、示教 + 学生操作，老师指导 6、考核要求 在学生实验过程中检查操作的准确性并纠正操作中的错误、分析原因。 7、实验报告要求 要求书写实验目的、实验原理、实验器材、实验步骤、实验结果、注意事项、实验体会或分析、等。 实验三 血液RNA的提