生物化学实验课件西南科技大学生命科学与工程学院首.pptVIP

琼脂糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化核酸的常用技术。核酸是带均匀负电荷的生物大分子，在电场中向正极移动，不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时，各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。以适当浓度的凝胶介质作为电泳支持介质，具有分子筛效应，使得分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离的目的。此为分离、鉴定、纯化核酸片段的标准方法。用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙锭（EB）进行染色，可直接在紫外灯下确定核酸在凝胶中的位置。 第六十三页，共九十页。 二、按有无固体支持物分类 1、自由电泳 显微电泳 移界电泳 柱电泳 自由流动幕电泳 等速电泳 第三十一页，共九十页。 2、支持物电泳 （1）无阻滞的支持物 纸电泳 醋酸纤维薄膜电泳 薄层电泳 （2）凝胶电泳 淀粉凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳 第三十二页，共九十页。 1.连续电泳：缓冲液的离子成分、PH、凝胶浓度、电位梯度都相同，带电颗粒电泳时仅具有电荷效应、分子筛效应。 2.不连续电泳：缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度、电位梯度不连续，带电颗粒电泳时具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。 三、根据电泳的过程的连续性分为 第三十三页，共九十页。 分子筛效应：分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率，这就是分子筛效应。分子量小，阻力小，移动快；分子量