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rg农学实验八酵母菌的形态观察细菌的生理生化反应会计学第1页/共14页一、目的1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法，学习观察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法；2、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的 重要作用；3、了解吲哚、甲基红、伏-普反应的原理及其 在肠道菌鉴定中的意义和方法。第2页/共14页二、基本原理 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。美兰是一种无毒性的染料，可用于鉴别细胞的死活。 糖分解试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂，倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 吲哚、甲基红、伏-普这三个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。第3页/共14页三、器材1、菌种：酿酒酵母、热带假丝酵母培养约2d的培养物；大 肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。2、培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基，PDA液体培养基、 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基3、试剂：吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指示剂，40％KOH，5％α-萘酚，乙醚，吲 哚试剂等。4、仪器或其他用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、 盖玻片等。第4页/共14页四、操作步骤1、酵母菌的形态观察：（1）酵母菌死活细胞的鉴别： 取菌液 滴加美兰染色液 盖上盖玻片镜检。（2）酵母菌液泡的观察： 取菌液 滴加中性红染色液 盖上盖玻片 镜检。（3）酵母菌细胞中肝糖粒的观察： 取菌液 滴加碘液 盖上盖玻片 镜检。2、细菌的生理生化反应： 将供试菌株分别接种在相应的培养液中，置适宜的温箱中恒温培养。在规定的时间内，选用相应的指示剂测定和观察试验结果。第5页/共14页第6页/共14页第7页/共14页第8页/共14页吲哚试验第9页/共14页第10页/共14页乙酰甲基甲醇试验(伏-普)第11页/共14页第12页/共14页五、实验报告1、绘图说明你所观察到的酵母菌形态特征；并分别说明经美兰染色后，酵母菌的活细胞、死细胞和衰老细胞被染成何种颜色，为什么？2、列表说明各供试菌对糖类的分解利用情况和吲哚、甲基红、伏-普试验结果。第13页/共14页六、预习糯米甜酒的酿制