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3. 真核生物中mRNA前体的加工：在细胞核内，mRNA的初始转录物被加工为分子大小不等的中间产物，称为核不均一RNA （hnRNA)。 hnRNA在转变为成熟的mRNA的过程中，需经以下的进一步加工： （1） 5’端加“帽”： 真核生物mRNA 5’端“帽”结构 5’,5’-三磷酸键 7-甲基鸟苷 第三十页，共四十三页。 真核生物mRNA 5’端“帽”结构 第三十一页，共四十三页。 * 生 物 化 学 原 理Principles of Biochemistry 杨 帆 第一页，共四十三页。 第二页，共四十三页。 第十四章 RNA的合成：转录和加工 DNA的转录 转录后加工 逆转录 第三页，共四十三页。 DNA的转录 转录transcription：指遗传信息从DNA转移到RNA的过程，即以DNA为模板，由依赖DNA的RNA聚合酶催化RNA合成的过程。 第四页，共四十三页。 参与转录的各因素： 1. 依赖DNA的RNA聚合酶： 作用特点： （1）以4种核糖核苷三磷酸作为底物，反应需要Mg2＋的参与 （2）需要适当的DNA作为模板 （3）合成的RNA链方向也为5’?3’ （4）反应无需引物，直接以DNA为模板合成新的RNA链 （5）RNA聚合酶无校对功能 第五页，共四十三页。 依赖DNA的RNA聚合酶催化的转录是不对称的： 在体内转录过程中，DNA双链中只有一条链或者某个区段作为模板进行转录。参与转录的DNA链被称为模板链（反义链），而另一条链则被称为编码链（正义链）。RNA含有与编码链几乎完全相同的碱基序列，除了以U代替T以外。 第六页，共四十三页。 E.Coli RNA聚合酶：含有α2β β ’σω亚基，其中α2β β ’构成核心酶，负责转录过程中RNA链的延伸。 起始亚基，为转录起始所必需 功能未知 第七页，共四十三页。 E.Coli RNA聚合酶的三维构像图 第八页，共四十三页。 2. 转录单位：RNA链的合成是从模板特定的部位起始的，经过链的延伸终止于特定的模板部位。一般将从转录起始点到转录终止点的整个区域称为转录单位。 参与转录的各因素： 第九页，共四十三页。 参与转录的各因素： 3. 启动子结构：启动子是指RNA聚合酶识别、结合并由此启动转录的一段DNA序列，位于转录起点的5’端上游区，启动子本身一般是不被转录的。 E. Coli 中的两个启动子序列： -10序列（Pribnow框）：TATAAT -35序列（识别序列）：TTGACA 第十页，共四十三页。 E. Coli 中不同基因的启动子序列 -10序列（Pribnow框） -35序列（识别序列） -35序列（识别序列） 第十一页，共四十三页。 转录的起始 第十二页，共四十三页。 原核生物转录的过程： 1. 模板的识别和转录泡的形成： σ亚基 第十三页，共四十三页。 转录泡结构 RNA聚合酶 模板链 非模板链 第十四页，共四十三页。 原核生物转录的过程： 2. 转录的起始： RNA聚合酶到达转录起始点，开始催化核苷三磷酸按照模板链上的碱基顺序合成RNA。此时σ亚基从全酶上脱离下来，解离后的σ亚基再与另一个核心酶组成全酶开始下一轮转录。 3. RNA链的延伸：转录泡延着模板链3’ ? 5’方向不断移动，转录泡内RNA链的5’端方向10－12个核苷酸始终与模板链形成杂合体。 4. 转录的终止：当RNA聚合酶达到终止子时，RNA转录将终止 第十五页，共四十三页。 转录的进行 第十六页，共四十三页。 终止子：具有终止功能的特定的DNA序列，为RNA聚合酶提供终止转录信号的DNA序列。 （1）不依赖于ρ因子的终止子：含有一个或多个富含GC的回文对称序列；含有一个多聚的A或T序列在回文序列后。 AGCCCGCCTAATGGCGGGCT TCGGGCGGATTACCGCCCGA AGCCCGCCUAAUGGCGGGCU 第十七页，共四十三页。 转录的终止 第十八页，共四十三页。 不依赖于ρ因子的转录终止 第十九页，共四十三页。 （2）依赖于ρ因子的终止子：这类终止子必须在ρ因子存在下转录才发生终止。这类终止子的回文结构中不含GC富集区，回文结构后也无寡聚U。 ρ因子：一种相对分子量约为45kD的蛋白质因子，起协助终止的作用。 第二十页，共四十三页。 依赖于ρ因子的转录终止 第二十一页，共四十三页。 真核生物的转录： 真核生物含有三种RNA聚合酶，根据它们对于α-鹅膏蕈碱 敏感度的不同，分为RNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。 真核生物的RNA聚合酶不能直接识别启动子起始转录，必须在其他的转录因子的帮助下开始转录。 真核生物DNA含有复杂的转录调控结构 第二十二页，共四十三页。