HIV实验质量控制与质量管理程序.pdfVIP

HIV实验质量控制与质量管理程序 1.目的：为HIV实验室各技术人员统一实验操作程序，保证 实验检测质量，特制定本程序。 2.适用范围：适用于HIV实验室技术人员。 3.规范性引用文件：《全国艾滋病检测技术规范》（2004 年 版）。 4.相关器材设备：酶标仪、洗板机、标准血清。 5.安全防护器材与措施：一次性乳胶手套、隔离衣、口罩、 帽子，取用试剂时应把试剂视作感染性材料对待。首先穿 好一次性隔离衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳胶手套后 再接触试剂进行试验。 6.操作步骤： 在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对 照质控血清。 内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照 血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须按照试 剂盒使用说明书使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒 中使用。 外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性 以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血 清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一 个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的 23 倍为 宜。 6.1 质控血清的制备和保存（以 ELISA 试验检测 HIV 抗体 为例） 6.1.1 外部对照质控血清的制备 HIV 抗体阳性和阴性血清，56℃ 30min 灭活，3000r/min， 离心 15min。弱阳性对照可以用 HIV 抗体阴性血清梯度稀释 HIV 抗体强阳性血清并标定后得到。按一年使用量配制（可 加入不影响检测结果的防腐剂）用 0.2 μm 滤膜过滤除菌。 6.1.2 外部对照质控血清的保存 6.1.2.1 按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20℃ 冻存于非自动除霜冰箱中。 6.1.2.2 外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存 放 28℃，供一周内使用。 6.1.3 外部对照质控血清的使用 每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验 的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间 差异，绘制质量控制图。 6.1.4 外部对照质控物的质量要求 质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变 异（cv＜20%），并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物 应无菌，并不含有影响 ELISA 反应的防腐剂。 6.2 质控图的建立及应用（以 ELISA 试验检测 HIV 抗体为 例） 最常用的质控图是 Levey-Jennings 质控图，使用累计 和技术或趋势分析技术的图形可提供系统偏移和漂移的状 况。 6.2.1 建立质控图参数 外部对照质控物的平均值和标准差应建立在实验室常 规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批 次检测取得至少 20 个数据；如果仅做少量批次的检测，也 至少做 5 个批次的检测，每个批次中不少于 4 个质控物测定 结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到 20 批 次数据后，替代临时性的平均值和标准差。 6.2.1.1 算术平均值 ( )：代表一组 S/CO 值的平均值。 x 为了统计学上有显著性意义，应该采用至少 20 次(天)所测 得的外部对照质控血清 S/CO 值结果计算出平均值。 s 6.2.1.2 标准差 ( )：是描述样品与均数之间离散程度的一 个指标，是与对照质控血清 S/CO 值均值有关的预期范围。 一组 S/CO 值的标准差以 s 表示。 c 6.2.1.3 变异系数 ( )：是反映各次S/CO 值相对于均值离 散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。 6.2.1.4 控制限：由实验室根据对质控物检测结果的平均 值和标准差来确定。例如 1 质控规则的控制限为外部对照 2S S/CO 平均值加减 2 个标准差；1 质控规则的控制限为外部对 3S 照 S/CO 平均值加减 3 个标准差。 x计算公式为： Σx