原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
第四节 核酸的分离与含量测定 一、分离提纯的基本过程 1. DNP、RNP的分离 2. 除蛋白 DNP和RNP的操作方法有所不同，但基本原理还是一样的。 (1) 氯仿法 将DNP溶液和等体积的氯仿:戊醇(3:1)剧烈振荡，离心，得三层离心物。 (2) 苯酚法 苯酚提取、离心，核酸留在水相中。 (3) 去污法 (SDS法) 用十二烷基硫酸钠使蛋白质变性，从而除去蛋白质。 (4) 酶法 用广谱蛋白酶使蛋白质水解。少量的RNA杂质可用RNAse除去。 3. 沉淀核酸 加2~3倍体积量的冷乙醇沉淀核酸，操作中须防止核酸的降解。 抑制核酸酶的降解：加抑制剂如柠檬酸钠，可以除去DNase作用时需要的Mg2+。 化学因素：避免强酸强碱。 物理因素：低温操作，避免剧烈搅拌。 二、含量测定 (一) 定磷法 DNA和RNA中都含有磷酸，RNA的平均含磷量为9.4%，DNA的平均含磷量为9.9%，因此可测定样品中的含磷量来计算DNA或RNA的含量。 (二) 定糖法 两种糖的颜色反应不同，用于定性和定量: 1. 核糖的测定 (地衣酚法)： 用于RNA的测定 实验三时请注意观察 2. 脱氧核糖的测定 (二苯胺法)： 用于DNA的测定 CH3CH2(CHOH)2 + H2SO4 → CHO(CH2)2-CO-CH2OH + H2O ω-羟基-γ-酮基戊醛 (三) 紫外吸收法 由于核酸的组成成分嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键．有强烈的紫外吸收，所以核酸也有强烈的紫外吸收。 最大吸收值在260nm。 不同的核酸有不同的吸收特性，所以可以用紫外吸收法来对核酸进行定量和定性测定。 * * 选材 破细胞 分离、提取 纯化 检测 贮存 溶 不溶 1 M NaCl 不溶 溶 0.14 M NaCl DNP RNP (NH4)2MoO4 + H2SO4 → H2MoO4 + (NH4)2SO4 钼酸胺 钼酸 12 H2MoO4 + H3PO4 → H3PO4?12MoO3 + 12 H2O 磷钼酸 *
文档评论（0）