生物化学参考第五节　蛋白质的重要性质.pptVIP

第六节　蛋白质的重要性质 一、蛋白质的大小、形状和分子量测定 二、蛋白质的变性与复性 三、两性解离性质及等电点 四、蛋白质胶体性质 五、蛋白质的沉淀 六、蛋白质呈色反应 七、蛋白质的免疫学性质 八、蛋白质的紫外吸收特性 Company Logo 蛋白质的大小、形状和分子量测定 形状：不对称常数 分子量测定方法 （1）分子筛层析法 Ve= k1- k2logM （2）SDSlog M = k- a D （3）生物质谱 P89 蛋白质变性与复性 　 ● 当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变或丧失，但并未导致其一级结构的变化，这种现象称为变性作用（denaturation）。 本质：破坏了形成和稳定蛋白质分子空间构象的次级键导致空间构象的改变和破坏。 表征：生物活性丧失；物理性质（溶解度、粘度、扩散系数、光谱特性等）和化学性质（化学反应，被酶解性）改变 应用：变性灭菌、消毒；变性制食品；抗衰老…… Company Logo 可逆变性：除去变性因素后，蛋白质 构象可以恢复的 不可逆变性：构象不能恢复的 Company Logo 蛋白质的复性 ● 蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性（renaturation）。 Company Logo  蛋白质两性解离性质和等电点 pH = pI 净电荷=0 pH pI 净电荷为正 pH pI 净电荷为负 Pr COOH NH3+ + H+ + OH- + H+ + OH- Pr COO- NH2 Pr COO- NH3+ 同一分子中可带有正、负两种电荷，羧基带负电而氨基带正电，这种分子称两性离子。 蛋白质和氨基酸一样，在纯水溶液和结晶状态中都以两性离子形式存在。 Company Logo 蛋白质的等电点 当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负电荷相等，净电荷为0，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该蛋白质的等电点 （isoelectric point，pI）。 溶液pHpI时，蛋白质分子带负电； 溶液pHpI时，蛋白质分子带正电 生理条件下 蛋白质胶体性质 由于蛋白质分子量很大，在水溶液中形成1-100nm的颗粒，因而具有胶体溶液的特征。可溶性蛋白质分子表面分布着大量极性氨基酸残基，对水有很高的亲和性，通过水合作用在蛋白质颗粒外面形成一层水化层，同时这些颗粒带有同种电荷，因而蛋白质溶液是相当稳定的亲水胶体。 Company Logo 蛋白质胶体性质的应用 透析法:利用蛋白质不能透过半透膜的的性质，将含有小分子杂质的蛋白质溶液放入透析袋再置于流水中，小分子杂质被透析出，大分子蛋白质留在袋中，以达到纯化蛋白质的目的。这种方法称为透析（dialysis）。 盐析法:在蛋白质溶液中加入高浓度的硫酸铵、氯化钠等中性盐，可有效地破坏蛋白质颗粒的水化层。同时又中和了蛋白质表面的电荷，从而使蛋白质颗粒集聚而生成沉淀，这种现象称为盐析（salting out）。 盐溶：加入少量中性盐可增大蛋白质溶解度的现象。 蛋白质的沉淀 蛋白质分子聚集而从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。 沉淀方法类别: 1、高浓度中性盐（盐析、盐溶、分级沉淀） 2、酸硷（等电点沉淀） 3、有机溶剂沉淀 4、加热变性沉淀 5、重金属盐类沉淀 6、生物碱试剂和某些酸类沉淀 五．蛋白质的沉淀反应precipitation reaction 由于蛋白质表面水化膜和蛋白质表面同性电荷发生变化，蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为蛋白质的沉淀。 蛋白质的沉淀有以下几种方法： 1）中性盐沉淀、 2）有机溶剂的沉淀 、 3）加热沉淀 、 4）重金属盐沉淀 、 5）等电点沉淀、 6）生物碱试剂的沉淀 。 要强调的是denaturation与precipitation是两个不同的概念，p91 中性盐沉淀反应 盐溶作用：蛋白质在低盐浓度下溶解度增加的现象。 盐析：高盐浓度时，因为破坏蛋白质水化膜并中和电荷，促使蛋白质颗粒相互聚集而沉淀，称为盐析作用。最常用的中性盐为(NH4)2SO