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泽黄颗粒及其拆方对糖尿病大鼠肾脏AQP1表达的调节效应(中医学论文资料)
文档信息
:
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目录
TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1
正文 1
文1:泽黄颗粒及其拆方对糖尿病大鼠肾脏AQP1表达的调节效应 1
1材料与方法 2
1.1材料 2
1.2方法 2
文2:中药泽黄颗粒对糖尿病大鼠肺组织水通道蛋白 5
1材料和方法 5
1.2方法 6
参考文摘引言: 11
原创性声明(模板) 12
正文
泽黄颗粒及其拆方对糖尿病大鼠肾脏AQP1表达的调节效应(中医学论文资料)
文1:泽黄颗粒及其拆方对糖尿病大鼠肾脏AQP1表达的调节效应
糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病(diabetesmellitus,DM)严重的微血管并发症,已成为DM患者的主要死因之一。DN的病理特点是早期肾脏高灌注,导致肾小球滤过率增高,肾小球基底膜(GBM)增厚,晚期出现肾小球结节样硬化,同时伴有肾间质和肾小管的病变。水液代谢紊乱将导致糖尿病性微血管病变的发展。中医药疗法在防治DN的过程中具有独特的优势。本研究观察泽黄颗粒及其拆方对高糖高脂饲料加STZ诱导的DM大鼠肾脏AQP1蛋白水平的表达、BG、HbA1c、UAER等指标的变化,旨在探讨AQP1的表达改变与DN水液代谢异常的关系以及泽黄颗粒及其拆方的药理效应,为DN的防治及泽黄颗粒临床应用提供依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物SD大鼠,雄性,5周龄,SPF级,共60只,体重为170~210g,第四军医大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(军)
1.1.2药物盐酸二甲双胍片,中美上海施贵宝制药有限公司;泽黄颗粒由黄芪、山药、丹参等药物组成,活血利水组份由丹参、泽兰等药物组成,均为颗粒制剂,由第四军医大学天然药物研究所提供。
1.1.3试剂与仪器链脲佐菌素(STZ)、胆固醇、胆酸钠,美国Sigma公司;兔抗大鼠AQP1,武汉博士德生物工程有限公司;辣根酶标记山羊抗兔IgG,康为世纪;DAB显色试剂盒,康为世纪;Image-ProPlus6.0专业图像分析软件,美国MediaCybernetics。
1.2方法
1.2.1造模、分组及用药将大鼠按体重随机分成两组:正常组10只,DM模型组50只。正常组喂食普通饲料;DM模型组喂食高糖高脂饲料,在高糖高脂饲料喂养4周后,以40mg/kg体重一次性空腹腹腔注射STZ(溶于0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液,PH4.4),72h后监测血糖,以连续3次空腹血糖≥16.7mmol/L,尿糖阳性,尿微量白蛋白定性测量阳性者确定为DM模型制备成功。大鼠造模成功39只,随机分为模型组10只、西药对照组10只、泽黄颗粒组10只、拆方组9只。该模型具有中度高血糖、高血脂、胰岛素抵抗以及典型的DN改变等特点[1]。正常组用等量枸橼酸盐缓冲液腹腔注射。
西药对照组以盐酸二甲双胍片0.5g?kg-1?d-1灌胃,泽黄颗粒组以泽黄颗粒4.23g?kg-1?d-1灌胃,拆方组以活血利水组份1.08g?kg-1?d-1灌胃,正常组、模型组大鼠以等量生理盐水灌胃。实验期间,各组大鼠自由饮水。
1.2.2标本采集各组大鼠于实验第12周末置代谢笼内收集24h尿液,检测尿量、尿白蛋白;再将大鼠麻醉后心脏取血,检测BG、Scr、BUN、HbA1c、TG及TC指标。采集肾脏标本放入液氮冻存,以备行Western-blot检测。
1.2.3生化指标检测BG、TG、TC、BUN、HbA1c、Scr采用全自动生化分析仪测定,尿白蛋白采用化学发光法于全自动蛋白分析系统测定,根据尿量计算UAER。
1.2.4AQP1Western-blot检测用裂解液提取组织总蛋白,按BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白定量,10%SDS电泳,转移蛋白至PVDF膜上。5%脱脂奶粉封闭,AQP1多克隆抗体(1:200稀释)4℃孵育过夜,二抗(1:1000稀释)与膜37℃孵育1h。化学发光法发光成像。以β-actin作为内参照,来对目的蛋白表达水平进行半定量分析。
1.2.5统计学处理采用(x±s)表示计量资料,采用One-wayANOVA分析组间差异,组间两两比较用t检验。相关分析采用一元线性相关分析。以SPSS17.0Software进行统计学分析,P0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1生化指标变化实验12周末,西药对照组、泽黄颗粒组和拆方组大鼠Scr、BUN、HbA1c、TG、TC、UAER与模型组相比差异均有统计学意义(P0.
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