羧基含量的测定.pdfVIP

羧基的测定 植物体内蛋白质降解时，第一步是由蛋白质酶 （肽酶）催化水解成多肽和自由氨基酸；第二 步是在氨基酸酶参与下，氨基酸水解脱氨、水解脱氨并脱羧基、还原脱氢、还原脱氢并脱羧基和 氧化脱氨基并脱羧基……，这些氨基酸途径的共同产物是氨，同时形成有机酸、醇、碳氢化合物 和CO 等。在探讨蛋白质降解机制中，有时需要测定羧基的变化。测定的原理是，由于氨基酸、 2 多肽和蛋白质的羧基在不同浓度酒精中解离常数不同，因而可以根据测定中用碱滴定时羧基变化 有异而予以确定。本法是在水-酒精介质中碱滴定时氨基 （碱性）解离度降低，水溶液中的中性 物质在酒精溶液中变成酸性，因此可以用碱对溶液中的羧基进行滴定。此法特别适用于短时间内 蛋白酶活性和植物个体发育中氨基酸变化的研究。 1.仪器设备 滴定管、试管若干。 2.操作方法 取5ml 蛋白质水解液置试管中，加入50ml97%酒精和4～5滴0.5%麝香草酚酞溶液后，以溶 于90%酒精的5mol/LNaOH 滴定至蓝色出现为止 （注意：由于蛋白质被过剩的NaOH 水解，几 分钟后颜色可能会消失）。同时以与测定样品时体积一样的4～5滴麝香草酚酞＋水＋酒精为对 照，并按测样品的流程以同样的溶于90%酒精的5mol/LNaOH 滴定至蓝色为止。然后根据样品 和对照中酸度