高压液相色谱法测定内源细胞分裂素.pdfVIP

高压液相色谱法测定内源细胞分裂素 细胞分裂素具有促进细胞分裂、抑制植物衰老等多种生理功能。目前从植物中分离和鉴定出 的天然细胞分裂素有几种，其中最主要的是玉米素和异戊烯基腺嘌呤以及它们与核糖形成的核苷。 高压液相色谱 （HPLC）是目前测定内源细胞分裂素较为有效的理化方法之一。HPLC 不同于普 通的液相色谱，其柱效可以达到每米100000 理论塔板数，所以分离效能可以与气相色谱 （GC） 相媲美。用HPLC进行分析，无须将所要分析的物质汽化，因此非常适合于分析那些不容易汽 化或者在高温下易于破坏的物质。用HPLC 分析细胞分裂素时一般采用紫外检测器检测，最小 检知量可以达到100pg。 1.仪器设备 HPLC 色谱仪、Zorbax C 柱、紫外检测器、低温冰箱、普通离心机、薄膜旋转蒸发器、分 8 液漏斗、恒温水浴、磷酸纤维素柱、LH Sephadex 柱、研钵等。 20 2.操作方法 1）细胞分裂素的提取：取新鲜植物组织数十克，迅速在液氮中冷冻 （冷冻后的材料可以在 -70℃下保存）。将冷冻组织研成粉末，然后在甲醇：氯仿：甲酸混合溶液 （v：v：v 12：5：3） 中匀浆，匀浆后再加入混合液