β-胡萝卜素测定.pdfVIP

β-胡萝 卜素测定 1 仪器设备 751分光光度计等。 2 操作方法 称取含有约10 μg β-胡萝 卜素试样一份，磨碎后放入圆底烧瓶中，每克试样 （少于1g 以1g计） 加入 10ml 含10%KOH 的甲醇溶液，在水浴上加热避光回流30min。冷却后离心，残渣用约10 倍于残渣量的甲醇悬浮后再离心。合并上清液放入分液漏斗中，加入 10倍量水和10倍量乙醚， 摇匀振荡萃取胡萝 卜素。静止分层后分出乙醚，下层再用等量乙醚苯取多次，直到醚层无色为止。 合并乙醚层，加入等体积水振荡，以洗去醚层中的残碱，重复数次，直到水层不呈碱性为止 （用 酚酞试验）。醚层尽量分去水分后，放入无水硫酸钠干燥数小时。经干燥的乙醚移入蒸馏瓶。无 水硫酸钠用乙醚洗至无色，所用乙醚也倒入蒸馏瓶，蒸去乙醚，残留物用少量己烷溶解后上氧化 铝柱层析。层析柱内径10mm，高100mm，装氧化铝量约7～8g，氧化铝粒度为100～200 目。 用己烷拌和装柱。展开剂为2%～14%的乙醚己烷液。收集相当于β-胡萝 卜素的流出部分。蒸干 后用5ml 己烷溶解，在波长452nm 下比色。己烷中的β-胡萝 卜素在波长452nm 下的摩尔消光系 数ε1% 2500，即溶液的OD 为0.25 时每ml 含β-胡萝 卜素1μg。 1cm 452 3 注意事项