倍半萜棉毒素含量的测定.pdfVIP

倍半萜棉毒素含量的测定 棉花种子在发育成熟过程中积累大量酚性倍半萜醛类物质，这些物质统称为倍半 萜棉毒素。在完全成熟的种子中，棉酚 （gossypol）是主要的酚性成分。用合适 极性的有机溶剂如甲醇或丙酮等可以将这些酚性倍半萜醛类物质从棉花种子中 提取出来，这些物质在酸性条件下同间苯三酚产生特异的颜色反应，在555mm 波长处具有强烈吸收峰，从而可用比色法测定反应产物光密度的变化，从棉酚制 作的标准曲线上查出待测样品中倍半萜棉毒素的含量。 1.仪器设备 分光光度计、研钵、离心机、恒温水浴锅等。 2.操作方法 1）提取：适量棉花种子加入液氮研磨至粉末，取约0.5g 棉籽粉加入5ml 70%丙 酮，室温振荡提取30 min，100000×g 离心3min 后移出上清液用于测定棉酚浓度， 残余物于60℃烘箱烘干至恒重用以计算棉花种子中倍半萜棉毒素的重量。 2）含量测定 （1）棉酚显色液配制：将8.35ml 浓HCl （12mol/L）用41.65m195%的乙醇稀释 至2mol/L，溶人0.5g 间苯三酚，配成10% （w/v）的间苯三酚溶液，4℃中避光 储藏备用。 （2）棉酚标准曲线绘制精确称取0.5 mg 棉酚标准品，完全溶入1ml 丙酮中配制 成浓度为0.5mg/ml 的棉酚标准液。分别吸取0，10，20，30，40，50，60μ标准 液