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倍半萜合成酶活性的测定 倍半萜合成酶是植物倍半萜类物质生物合成途径中的一个关键酶，它催化法呢基焦磷酸 （FPP） 线性分子环化形成环状的倍半萜代谢中间产物如杜松烯、马兜铃烯等，所以又称为倍半萜环化酶。 根据其催化反应机制可用同位素掺入法测定其酶活性，利用³H 标记的FPP 为反应底物，在37℃ 下经该酶催化将³H 掺入环状倍半萜分子中，用正己烷萃取反应产物，然后测定萃取液放射性强 度，计算酶活性。1.仪器设备 液体闪烁计数器、低温离心机、恒温水浴锅、研钵等。 2.操作方法 1）酶粗提液的制备：试验材料根据需要可选用植物的根、茎、叶、种子或组织培养材料。适量 供试材料加入液氮，冷冻研磨至粉末，加入2 倍体积的10mmol/LTris-HCI （含15mmol/LMgCl ， 2 20%甘油，5mmol/LDTT，pH7.5）缓冲液，匀浆，于10000×g （4℃）离心20min，上清液为酶 粗提液。 2）酶活性测定：在50μl 反应体积中加入5μ250mmol/L Tris-HCI （含 150mmol/LMgCl ，50