3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）活性的测定.pdfVIP

3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A 还原酶 （HMGR）活性的测定 HMGR 既是甲羟戊酸生物合成途径的参与酶，也是类异戊二烯生物合成途径中的早期酶。它催 化3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A 还原为甲羟戊酸，然后甲羟戊酸进一步参与类异戊二烯化合物的 形成与转化。已经证实，HMGR 在动物、真菌、昆虫和植物的类异戊二烯的生物合成中具有重 要的调节作用。植物HMGR 分布在细胞的不同间隔，如叶绿体、细胞质，可能还有线粒体，因 此，提取该酶的方法有所不同。下面我们主要介绍细胞质HMGR 酶的提取和测定方法。 1.仪器设备 匀浆器、70μm 尼龙网、离心机 （200×g，100000×g）、水浴锅、薄板层析 （TLC）设备、液体 闪烁计数器等。 2.操作方法 1）样品制备：1g样品植物材料和2ml 100mmol/L磷酸钾缓冲液（含100mmol/L磷酸钾，0.25mol/L 蔗糖，50mmol/LKCl，30mmol/L EDTA，10mmol/L β-羟基乙醇，少量PVP，pH7.0）在匀浆器 中制成匀浆，通过70μm 尼龙网过滤。离心 （200×g，10min）收集上清液，再离心 （10000×g， 1h）。沉淀重新悬浮于含25～50mmol/LDTT 的100mmol/L 磷酸钾缓冲液中备用。 2）酶活性测定