丙酮酸激酶活性的测定.pdfVIP

丙酮酸激酶活性的测定 丙酮酸激酶 （Pyruvatekinase，或 ATP-Pyruvate2-O-Phospho-Transferase，EC2.7.1.40）是糖酵解 途径中重要的调节酶，催化磷酸烯醇式丙酮酸 （PEP）与ADP 反应生成丙酮酸和ATP。反应不 可逆，需二价和一价金属离子同时存在。丙酮酸激酶普遍存在于微生物和植物中。在真核生物中， 此酶一般存在于细胞质中；但在植物细胞中，此酶还存在于质体中。此酶一般是四同聚体，亚基 分子量约55±5kDa，偶有报道为其他聚合态。此酶的最适 pH 在6～8之间，其中胞质的酶略偏 酸性，质体的酶略偏碱性。此酶的活性受许多效应剂调节，其中谷氨酸对此酶活性有抑制作用， AMP、天冬氨酸、磷酸二羟丙酮等对胞质的酶有激活作用，3-磷酸甘油醛和3-磷酸甘油酸对质 体的酶有激活作用。 丙酮酸激酶的活性测定一般采用偶联法，即此酶催化生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶的作用下进一步 + 转化成乳酸，同时将NADH 氧化成NAD 。检测340nm 处光吸收的变化，即能推知丙酮酸激酶 的催化活性。偶尔也有研究者使用丙酮酸比色测定法。但后者远没有前者简便、灵敏、准确。 1 仪器设备 高速冷冻离心机、恒温水浴、紫外分光光度计等。 2 操作方法 1）粗酶样品的制备