果糖-1,6-二磷酸酯酶活性的测定.pdfVIP

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  • 2023-03-08 发布于上海
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果糖-1,6-二磷酸酯酶活性的测定 果糖-1,6-二磷酸酯酶 (FBPase)是磷酸戊糖途径的关键酶,它催化FBP+H O→F6P+P ,对光合 2 i 环的运转和光合产物转化以及输出起着控制作用,它既是还原戊糖磷酸途径的调节中心又是形成 淀粉的分叉点。 1 仪器设备 紫外分光光度计、组织捣碎机、低温离心机等。 2 操作方法 1)酶的提取 在4℃条件下进行。植物叶片洗净、擦干后按1:2.5 (w/v)比例加提取缓冲液 (含100mmol/L Tris-HCl,pH8.2;1mmol/L EGTA,7mmol/L 巯基乙醇,50ml/L 甘油)。在捣碎机中捣碎4 次, 每次15s (间隔15s),匀浆经4 层纱布去粗后离心 (3000×g)20min。所得酶液备用测活。 2)活力测定:利用偶联方法,检测340nm 处 OD 值的变化。室温测定,反应液1ml,含4 mmol/LFBP,5mmol/LMgCl ,0.5mmol/LNADP,100mmol/L Tris-HCl(pH8.2)。1.6IU 的磷酸葡 2 萄糖异构酶和1IU葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,反应以加入1mmol/L

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