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- 2023-03-08 发布于上海
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醇脱氢酶活性及同工酶测定
土壤渍水之所以危害植物是渍水造成的缺氧环境使植物根系和地上部的有氧呼吸受到抑制
和无氧呼吸得到加强所致。作为植物对渍水 (或缺氧)胁迫的一种反应常显示其体内醇脱氢酶
(ADH)活性的显著上升,同时其同工酶谱也会发生明显变化。因此 ADH 活性及同工酶的变
化可作为植物遭受渍水胁迫的一种生理指标。
+
ADH (EC.1.1.1)是以乙醇为底物、以NAD 为电子受体的氧化还原酶:
+
反应后NAD 还原为NADH,其还原速度与酶活性成正比,因此可根据340nm 处光吸收变
化进行测定。ADH 同工酶可用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定。
一、醇脱氢酶活性的测定
1.仪器设备
冷冻离心机、紫外分光光度计。
2.操作方法
1)酶粗提液制备:2g 受渍水或缺氧处理的玉米和大豆幼苗的根,加5ml 预冷的酶抽提缓冲
液[50mmol/L 磷酸缓冲液,pH7.5;5mmol/LMgCl ;1mmol/L 苯甲基磺酰氟 (PMSF)],于冰
2
浴中研磨,匀浆后用4 层纱布过滤,滤液于4
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