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几丁酶活性的测定 几丁质 （壳多糖）是自然界数量仅次于纤维素的多糖，广泛存在于硅藻、真菌、昆虫、甲壳 动物等。植物体内虽不具有几丁质，但几丁酶在植物内广泛存在，在植物染病、处于其他逆境或 经乙烯等化学药剂处理后，可诱导植物体内几丁酶活性上升。 测定几丁酶活性可使用脱乙酰几丁、乙二醇几丁、氢同位素标记几丁或胶状几丁等为底物。 1.仪器设备 分光光度计、研钵或组织捣碎机、离心机、透析袋、恒温水浴等。 2.操作方法 1）胶状几丁质的制备：称取1g 几丁质，加入4ml 丙酮研磨至糊状，其间可适量加入丙酮， 应充分研细。在 10℃下边研磨边缓缓加入陈HCI40ml，几分钟后，用玻璃棉过滤，然后将滤液 缓缓加入到剧烈搅拌的50%乙醇 （至少是滤液的5倍体积以上）中，使胶状几丁质沉淀析出。 倾去上清液 （或离心），收集胶状几丁沉淀，用蒸馏水冲洗几次后，置透析袋透析过夜。胶状几 丁质应避光保存于冰箱。 2）酶蛋白的提取：称取植物材料，加5倍体积0.1mol/L 的乙酸缓冲液 （pH5.0）研磨，于 10000×g 离心10min，弃去沉淀。将上清液透析过夜后，10000×g 离心10min，上清液置于冰箱 备用。 3）标准N-乙酰氨基葡萄糖测定 ①试剂配制：称取0.5g 高铁氰化钾，