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蛋白质磷酸化活性的测定 蛋白质磷酸化作为细胞信号转导过程中的一个重要步骤，在植物的生理过程中起着举足轻重 的作用。而蛋白质磷酸化是通过蛋白激酶的活性来实现的钙依赖蛋白激酶 （calmod-ulin-like domain.proteinkinase 或calmodulin dependentproteinkinase，简称 CDPK），是植物细胞中最重 要的蛋白激酶之一。CDPK 广泛存在于植物细胞的各种亚细胞成分中，其中包括细胞质、细胞膜、 细胞核、细胞骨架等。所以要测定某一细胞成分的CDPK 活性就首先将这一部分与其他成分分 离。在完整的活性细胞中，CDPK 的活性大小是受到很多因素调节的，一旦细胞的完整性被破坏， 细胞内溶酶体就会释放出蛋白水解酶，这些蛋白水解酶能够使CDPK 发生水解而失去活性。为 了减少蛋白水解酶的作用，首先所有的操作过程应该在低温下进行，其次加入蛋白水解酶的抑制 剂 （如PMSF 等）。只有这样才能得到有活性的CDPK 待测液。下面以CDPK 为例介绍一下蛋 白质磷酸化活性测定的方法。1.仪器设备 有机玻璃防护板 （β-射线防护）、手持射线检测器、液体闪烁计数仪、电泳仪、平板式电泳 槽、曝光暗盒、酸度计、恒温水浴、台式离心机、定量加样器、组织捣碎机、电吹风、通风柜等。 2.操作方法 1