蛋白酶（肽酶）活性的测定.pdfVIP

蛋白酶 （肽酶）活性的测定 蛋白酶属于酰胺酶类，既是分解CO 与NH-基之间酰胺键的酶，能催化分解蛋白质，又能催 化蛋白质的产物水解成氨基酸。小麦等一类禾谷类植物中存在多种蛋白酶，如有在pH5 下分解 蛋白质的为多肽蛋白酶；pH7 下分解多肽为氨基酸的多肽酶和pH7.8下分解二肽为氨基酸的二肽 酶等。 1.仪器设备 凯氏定氮装置、分光光度计、研钵。 2.操作方法 1）蛋白酶活性的测定：样品可用水稻或小麦叶片或种子胚。取3份各为0.8g 的样品置入研 钵中，各加入20ml 蒸馏水，研磨后，将悬浮液借助10ml 水转到50ml 量瓶中，再加入5mlpH5 的磷酸缓冲液和10滴甲苯，其中2 个量瓶盖上瓶盖，置40℃温箱中保温20h。后取出，另以第 三瓶为对照。三者同时分别加入3ml4%的磷钨酸，摇荡10～15min，以水稀释到50ml，混匀。 以干滤纸滤到烧杯中。从每个烧杯中取25ml 清亮滤液，装人100ml 凯氏瓶中并加入0.4g硫酸钾、 0.3ml10%钼酸钠、2ml 浓硫酸，置电炉上文火加热蒸发，消化至溶液透亮时，停止加热。冷却后 加入5ml 水，转移到250~300ml 烧杯中，并用20ml 水冲洗残留物后作滴定。在甲基橙存在情况 下用2mol/LNaOH 中和至指示剂呈现黄色。然后加入含有溴酸钾的