蛋白质的提取和测定.pdfVIP

蛋白质的提取和测定 大部分蛋白质能溶于水、稀盐、稀碱或稀酸溶液中，因此可以用这些溶剂从样品中提取蛋白 质，一般以水溶液为主。稀盐溶液和缓冲溶液对蛋白质稳定性好，溶解度大，通常都采用0.02～ 0.05mol/L 的磷酸缓冲液和碳酸缓冲液，以及0.15mol/LNaCl 溶液较多。采用的稀碱溶液则以 0.1~0.2mol/LNaOH 为宜。 一些和脂类结合较牢或分子中非极性侧链较多的蛋白质不溶于水、稀盐和稀酸、碱中，所以 常用不同比例的有机溶剂进行提取.例如植物种子中的玉米蛋白、麸蛋白等以70%～80%乙醇提 取。 1.仪器设备 分光光度计、研钵或组织捣碎机、离心机、凯氏定氮设备、透析袋、容量瓶等。2.操作方法 1）蛋白质的的提取 （1）试验材料根据实验需要，可选各种植物的种子、根、茎、叶等。如系油料作物种子， 须先捣碎，用乙醚或石油醚浸泡2～3 次，进行脱脂，然后以分液漏斗分离之，多余的溶剂则放 在空气中让其挥发。在用未知材料操作时，先用个别样品寻找适合溶解该材料的蛋白质溶剂，再 采用水溶解清蛋白和部分球蛋白，然后以盐溶液溶解清蛋白及全部球蛋白，碱溶液溶解清蛋白、 球蛋白及谷蛋白。 （2）通常先用5倍量 （重量计算）溶剂对材料进行提取，在以后的提取中，将溶剂体积减 少至3～4 倍