几种糖苷酶活性的测定.pdfVIP

几种糖苷酶活性的测定 糖苷酶与植物细胞生长发育过程中壁的松弛或加固有关，还与植物细胞的识别和一些信号分 子的产生相联系。以相应单糖的对-硝基苯糖苷为底物，根据酶水解相应的糖苷键，释出的对-硝 基苯酚的量，可测定相应糖苷酶的活力。 1.仪器设备 分光光度计、研钵或组织捣碎机、高速冰冻离心机、恒温水浴。 2.操作方法 1）酶蛋白的提取：将植物材料加5倍体积的柠檬酸-磷酸缓冲液 （pH5.0）冰浴上研磨，在 4℃下15000×g 离心20min，弃去沉淀，上清液放置冰箱备用。 2）标准对-硝基苯酚浓度测定：将 1mmol/L 浓度的P-硝基苯酚准确稀释到150μmol/L，再稀 释至不同浓度。然后将不同浓度的P-硝基苯酚1ml 放入试管中，并加入 1mol/L 的碳酸钠溶液 2ml，于400nm 处测定光密度，以光密度为纵坐标，P-硝基苯酚浓度为横坐标绘制标准曲线。 3）几种糖苷酶的活力测定 （1）α-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶：分别是以P-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷和P-硝基苯-β-D- 吡喃葡萄糖苷为底物。反应液含0.4ml5mmol/L 的底物，0.5ml 磷酸-柠檬酸缓冲液，pH6.0；0.1ml 酶液。在37℃反应 15~30min。加入2ml 浓度为1mol/L 的碳酸