游离脯氨酸的测定.pdfVIP

游离脯氨酸的测定 在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，此产物在520nm 波长下具 有最大吸收峰。酸性氨基酸和中性氨基酸不能与酸性茚三酮反应；碱性氨基酸由于其含量甚微， 特别是在受渗透胁迫处理的植物体内，脯氨酸大量积累，因此碱性氨基酸的影响可忽略不计。 1.仪器设备 可见光分光光度计、离心机、水浴锅。 2.操作方法 1）脯氨酸提取：取0.05～0.5g 小麦叶片，用3%磺基水杨酸溶液研磨提取，磺基水杨酸的 最终体积为5ml。匀浆液转人玻璃离心管中，在沸水浴中浸提 10min。冷却后，以3000r/min 离 心10min，取上清液待测。 2）含量测定 （1）标准曲线制作：在 1～10 μg/ml 脯氨酸浓度范围内制作标准曲线。取标准溶液各2ml， 加入2ml3%磺基水杨酸、2ml 冰乙酸和4ml2.5%茚三酮溶液，置沸水浴中显色60min。冷却后， 加入4ml 甲苯萃取红色物质。静置后，取甲苯相测定520nm 波长处的吸收值，依据脯氨酸量和 相应吸收值绘制标准曲线。 （2）样品测定：取2ml 上清液，加入2ml 水，再加入冰乙酸等显色试剂，同标准曲线程序 进行显色、萃取和比色。 3.注意事项 （1）配制的酸性茚三酮溶液仅在24h 内