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植物油中不饱和脂肪酸的测定 用于分离较长链不饱和脂肪酸的方法有纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱 法等。 1.仪器设备 气相色谱-质谱联用仪 （GC-MS）、高压液相仪、紫外检测器、层析缸、烘箱、研钵或组织 捣碎机等。 2.操作方法 1）纸色谱法：由于脂肪酸分子中，疏水集团 （甲基、次甲基、芳香环）占优势，因此，必 须将滤纸涂上疏水物质作为固定相，而用极性溶剂作为流动相，才能分离脂肪酸。这种层析称为 反相层析。纸色谱法简便、灵敏。 （1）制备反相层析滤纸：将裁好的新华1号滤纸浸入5%液体石蜡的苯或乙醚溶液中，取 出晾干备用。 （2）点样后用80%丙酮或90%乙酸进行展开约3h 左右。 （3）显色 a.取出反相层析滤纸即可用耐尔蓝 （Nileblue）进行喷显。将 15ml 三乙醇胺加到50ml 0.2% 的耐尔蓝乙醇溶液中，此时溶液由蓝色转变为红色，再加50ml 乙醇稀释。喷显后脂肪酸在暗红 色背景上呈现蓝绿色斑点，亚油酸等不饱和脂肪酸斑点放置之后转为黄色。 b.用碘蒸气显色，灵敏度小于1μg。 （4）临界对的分离：临界对是指具有相同Rf值的饱和和不饱和的脂肪酸。临界对的分离， 常采用以下几种方法： a.双向层析：第一