血型检查方法学评价及其质量控制.pptVIP

鉴定方法 反定型，试管法 第十二页，共三十九页。 鉴定方法 试管法评价——优点 试管法是交叉配血试验中最基础的试验方法之一。 与玻片法原理相同，但是借助试管更大的反应空间，并对待测红细胞予以一定的浓度的稀释或者加入更多的待测红细胞，通过低速离心后可根据有无肉眼可见凝集反应来判断结果。 由于待测红细胞经过稀释，在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度，从而提高了试验的敏感性。比玻片法更具有准确可靠的优点。 第十三页，共三十九页。 鉴定方法 试管法评价——缺点 只能检测出完全抗体（抗A、抗B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。 本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。 易受冷凝集素的干扰。 第十四页，共三十九页。 方法学评价 盐水凝集法 操作简便，无需特殊仪器。 玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。不适于反向定型。 试管法：用离心法加速反应，所需时间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型鉴定方法。 只能检测完全抗体易受冷凝集素干扰 第十五页，共三十九页。 鉴定方法 凝胶微柱法 第十六页，共三十九页。 鉴定方法 凝胶微柱法的结果 第十七页，共三十九页。 方法学评价 凝胶微柱法 重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。 试剂成本较高，需用离心设备。 根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。 结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。 第十八页，共三十九页。 鉴定方法 全自动微板法 标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止 反应前后吸光度值增加数值的计算 对血型进行正定型与反定型 第十九页，共三十九页。 方法学评价 全自动微板法 此法正反定型试验，准确率高，且能提高检测灵敏度，使弱凝集样本更加易显现。 快速、准确、自动化程度高等优点，适合批量操作。 血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点，目前在各大采供血机构已得到广泛应用。 第二十页，共三十九页。 鉴定方法 流式细胞技术 稀释：将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五的红细胞悬液。 标记：分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放置15min待受检红细胞上的血型抗原与相应荧光标记抗体结合后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。 检测：重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞，通过软件分析，从而得到待测样本的红细胞血型。 第二十一页，共三十九页。 方法学评价 流式细胞术 在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，检测结果准确，重复性好。 特别适合应用于ABO血型亚型的快速鉴定。 目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液中的胎儿红细胞用于产前非侵入性胎儿血型检测。 第二十二页，共三十九页。 质量控制 1.标准血清 要求：新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污染 常用的抗血清有： 人血清ABO血型抗体：稳定性高，已灭活补体 人ABO血型单克隆抗体：稳定性较人血清抗体的稳定性差 第二十三页，共三十九页。 质量控制 2.被检红细胞 标本新鲜，严防污染。 某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。 当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。 第二十四页，共三十九页。 质量控制 3.试验器材 器材清洁、干燥、标记清楚。 用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。须设置对照。 红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。 反应温度、反应时间、离心时间。 弱A亚型和弱B亚型，肉眼判断必同时须用显微镜复查。 第二十五页，共三十九页。 Rh血型系统抗原及抗体 Rh血型系统抗原 目前已发现的Rh抗原有45种，其中与人类关系最为密切的是D、E、C、c、e五种。 D抗原的抗原性最强。 Rh血型系统抗体 绝大多数Rh抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的IgG型免疫性抗体。 主要Rh血型系统抗体有抗D、抗E、抗C、抗c、抗e五种，其中抗D最为常见。 第二十六页，共三十九页。 Rh血型检测方法 酶介质法 聚凝胺试验（polybrene test） 第二十七页，共三十九页。 Rh血型检测方法 抗球蛋白试验（antiglobulin test） 第二十八页，共三十九页。 血型检查方法学评价及其质量控制 第一页，共三十九页。 血型概述 血型是人类血液以血型抗原为表现型的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。 血型鉴定(b