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异胡豆甙 （strictosidine）合成酶活性的测定 异胡豆甙合成酶是长春花生物碱早期合成过程中的关键酶，存在于液泡膜上，催化色胺和次蕃木 鳖甙 （secologanin）合成异胡豆甙，该酶活性可以通过HPLC 测定单位时间异胡豆甙的合成量来 测定。 1.仪器设备 高压液相色谱仪 （HPLC）、离心机、研钵、pH 计、Cus 预处理柱、注射器等。 2.操作方法 1）酶提取：植物材料先在液氮中速冻。在研钵中加入少量石英砂，每克材料加入0.05gPVP 和 1ml 0.1mol/L Tris （含3mmol/LDTT，1mmol/L EDTA，pH8.0）缓冲液，用力研磨成匀浆，然 后在 10000×g 离心30min，上清液用30%～50%饱和度的硫酸铵沉淀，10000 ×g 离心30min，收 集沉淀，将沉淀溶解于0.1mol/LNaH PO 缓冲液 （含1mmol/LDTT，0.02%叠氮化钠，pH6.8） 2 4 中，用Sephadex G-25脱盐，再用Sephadex G-75 除去样品中含有的异胡豆甙，最后样品保存在 -20℃冰箱中。 2）酶活性测定：取含有100mmol/LD （+）-葡萄糖内酯的0.1mol/LNaH PO /NaOH 缓冲液 （含