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脂肪酶的分离纯化及活性测定 脂肪酶 （E.C.3.1.1.3）是一种甘油酯水解酶，可以水解脂肪分子中的甘油酯键，将脂肪 （甘 油三酯）水解为甘油及游离脂肪酸。脂肪酶广泛存在于动、植物及微生物中，在脂类的消化和吸 收过程中起重要作用。由于它是脂肪分解代谢中第一个参与反应的酶，所以一般认为它对脂肪的 转化速率起着调控作用。 1.仪器设备 层析柱、部分收集器、离心机、恒温振荡水浴、分光光度计、具塞玻璃试管等。2.操作方法 1）脂肪酶的纯化：脂肪酶是一种“界面酶”，底物是不溶于水的脂肪。该酶的催化反应是靠 其酶本身的疏水头依附在底物表面进行的，结构中有较强的疏水基团。依据这一原理，可以利用 疏水作用层析纯化脂肪酶。 A.疏水作用层析试剂的制备 （1）SESA 与纸纤维素醚化反应：取300ml 已配制的对-β-硫酸酯己砜基苯胺 （SESA）溶 液与40g 已活化的纸纤维素混合，用0.5mol/LNaOH 调节 pH 至11，置于83℃恒温中40min 并 不断搅拌，用0.5mol/LNaOH 洗涤2 次，再用重蒸水洗2 次，压干，即得 ABSE-纤维素。 （2）重氮化反应：在已醚化的纤维素中加入 100ml 重蒸水，捣匀，放在0～5℃水浴中 （水 浴置于通风橱内），加入25ml1mol/LHC