酶工程-实验1酶蛋白的定量测定及纯度检测.pptxVIP

实验一 酶蛋白的定量测定及纯度检测;实验目的 1、掌握考马斯亮蓝法测定酶蛋白含量的原理 和方法 2、掌握SDS-凝胶电泳检测酶蛋白纯度的原 理和方法;一、实验原理 考马斯亮蓝法：根据蛋白质与染料特异性结合原理设计的。考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm处；当它在酸性溶液中与蛋白质结合后变为蓝色，这个结合主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。;其结合物在595nm左右波长下有最大光吸收,而且光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。该结合反应在2min左右的时间内达到平衡，且在室温下1h内保持稳定。 该法具有操作简便、反应灵敏、稳定性强的优点。 适用测定蛋白质浓度的范围为0～1 000μg／mL。 ;二、实验材料 1.考马斯亮蓝G-250 2.标准蛋白液：0.5mg/mL牛血清白蛋白 3.NaCl溶液 4.木瓜凝乳蛋白酶纯化酶 5.分光光度计;三、实验方法;四、实验结果 1、做出标准曲线并求出其相关系数 2、求出木瓜凝乳蛋白酶含量（μg/mL ）; §2. SDS-凝胶电泳检测木瓜 凝乳蛋白酶的纯度;一、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶：是由丙烯酰胺和交联剂甲叉丙烯酰胺在催化剂作用下，