体内药物分析方法的建立和验证.pptxVIP

体内药物分析方法的建立和验证第1页/共71页 2023/4/292第四章 体内药物分析 方法的建立与验证第2页/共71页 2023/4/293分析方法的设计依据分析方法建立的一般步骤分析方法验证的内容与要求体内药物分析应用示例本章内容提要第四章 分析方法的建立与验证第3页/共71页 2023/4/294第一节 分析方法的设计依据建立分析检测方法的主要依据待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况分析测定的目的与要求生物样品的类型与预处理方法实验室条件第四章 分析方法的建立与验证第4页/共71页 2023/4/295一、待测药物的理化性质及体内存在状况准确测定生物样品中的药物或其特定代谢物 ——预处理——待测物从结合物或缀合物中释放选择样品预处理方法——首先应考虑 ——待测药物的理化性质 ——药物在生物体内的存在状况 ——药物在生物体内的生物转化(代谢)途径第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第5页/共71页 2023/4/296(一)待测药物的理化性质 药物的pKa值、亲脂性、溶解度、分配系数等——预处理及检测方法 具有亲脂性——在适当的pH值下用溶剂萃取 具有强极性或亲水性——沉淀蛋白、固相萃取、离子对萃取或衍生化后萃取等 具有挥发性——GC测定法 具有光谱或电化学特性——分析检测方法 药物的稳定性——萃取浓缩技术 对酸碱不稳定——避免使用强酸或强碱性溶剂 对热不稳定——避免高温蒸发溶剂第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第6页/共71页 2023/4/297(二)待测药物的体内存在状态?与血浆蛋白结合的强弱及结合率的高低 ——分离萃取方法 ?蛋白结合较强——不宜直接采用溶剂萃取?体内浓度高低、代谢过程及其代谢产物 ——分析检测技术 ?浓度较低（尤其有代谢产物共存） ——代谢产物的干扰与特定代谢产物的同时测定 ——采用LC-MS、EIA等分析检测技术 第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第7页/共71页 2023/4/298二、分析测定的目的与要求 体内药物分析的目的——影响分析方法的应用 ?药代动力学——研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程 ——血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢产物 要求 ——同时测定原形药物和代谢产物 检测 ——宽线性范围(Cmax～Cmax的1/20)、高灵敏度(10-9g/ml)和高专属 性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离) 方法 ——不必强调方法的简便、快速； ——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第8页/共71页 2023/4/299二、分析测定的目的与要求 ?临床治疗药物监测 ?有效治疗浓度范围内药物浓度 方法——尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的测定 ——大多采用UV、RIA或EIA等 ?中毒患者的临床抢救 ?药物浓度极高 方法——不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性和分析速度 ——大多采用色谱及其联用技术GC、GC-MS、RIA或EIA第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第9页/共71页 2023/4/2910三、生物样品的类型与预处理方法 生物样品的类型与预处理方法——决定分析方法的应用 ?以血浆或血清为分析样品 采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术 ——分析样品较为“干净”，可用HPLC检测 ?用RIA分析 ——样品的预处理方法可较为粗放 ——经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测定第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第10页/共71页 2023/4/2911四、实验室条件 在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑到实验室现有的或有可能在其它实验室使用的仪器装备，合理选择可行的分析方法。第四章 分析方法的建立与验证第一节 分析方法的设计依据第11页/共71页 2023/4/2912第二节 分析方法 建立的一般步骤 一、分析方法的选择二、分析方法的建立 (一)??检测条件的筛选 (二) 分离条件的筛选第四章 分析方法的建立与验证第12页/共71页 2023/4/2913一、分析方法的选择 体内药物分析方法的设计 生物样品中的药物浓度——决定分析方法的首要因素 生物样品中药物或其特定代谢产物的浓度低、样品量少 ——难以通过增加取样量提高方法灵敏度 ——通过选择适当的分析方法适应样品分析需求 体内药物分析中常用分析方法——特点见表4-1第四章 分析方法的建立与验证第二节 分析方法的建立步骤第13页/共71页 2023/4/2914二、分析方法的建立分析方法建立