支原体污染快速检测 赛多利斯.pptxVIP

支原体污染快速检测赛多利斯王赟 主要内容?支原体污染的危害?支原体污染快速检测的方法?支原体污染快速检测的关键要素 Mycoplasma 支原体支原体又称霉形体，是目前已知最小最简单的细胞（直径0.13-0.18μm)。无细胞壁，具有多形性。可通过滤菌器。特点? 多形性、可塑性、滤过性? 基因组小，含有DNA和RNA? 以二分裂或芽生方式繁殖? 对一般的抗生素有抵抗力 支原体污染? 影响细胞的生长状态和形态导致细胞生长缓慢甚至停止，细胞病变，细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。? 支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常有些实验结果仅能在支原体阳性的细胞中得到，实验的重复性、可靠性受到严重影响。 哪些样品需进行支原体检测？样品类型ü 主细胞库/工作细胞库ü 病毒培养/收集ü 通过细胞制备的其他生物制品 培养法《中国药典2015版》——3301 支原体检查法主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时，应同时进行培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）。......也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法。28天 病人QC放行检测：分离支原体内毒素无菌产品培养，生产 细胞治疗类产品的检测挑战? 挑战：基于培养法的QC放行检测，花费时间过久? 需求：支原体快速检测 支原体快速检测需求制药Time is money!加快产品放行确保病人安全快速，可信赖ATMPHow much time dowe have?产品有效期结果可靠，可用于发表和开发RDCan I trust myresults?实验结果的准确性 qPCR法Real-time QuantitativePCR“实时，荧光，定量”通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，从而实现对起始模板定量及定性的分析。 TaqMan ? 探针法 VS 其他检测技术Microsart ATMPSYBR Green 染料法传统 PCRTaqMan ? 探针法? 通过琼脂糖凝胶电泳判定结果? 耗时长? 高特异性????特异性较低需进行熔解曲线耗时长? 准确性高? 特异性低? 无需进行溶解曲线? 时间快? 易造成假阴性/阳性结果? 需额外其他设备结果判定易受影响? 存在假阴性/假阳性风险 qPCR法检测关注重点? 检测速度? 检测特异性? 检测灵敏度? 稳定性? 是否经过验证 消除假阳性风险特异的DNA扩增§ 利用TaqMan探针，保证支原体DNA的特异性扩增§ 无背景DNA影响§ 结果特异、可靠 消除假阴性风险内参基因 阳性对照§ 利用内参基因控制PCR抑制§ 利用阳性对照控制qPCR反应条件§ 高特异性 合规性符合E.P.要求 合规性符合E.P.要求 稳定性COA证明文件§ 确保试剂盒产品质量§ 确保检测结果可重复性 产品快速放行——qPCR法支原体检支原体快速检测测QC放仅需3h行天数 028 赛多利斯支原体检测产品§ 基于TaqMan探针法，特异性高§ 依据欧洲药典EP2.6.7进行验证§ 具有Internal Control，消除假阴性风险§ 具有支原体标准品，可用于方法验证 Thank You!