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NY/T?５４５—２０２３ 猪痢疾诊断技术 １　范围 本文件规定了猪痢疾?的?临?床?诊?断、粪?便?和?大?肠?组?织?中?猪?痢?疾?短?螺?旋?体?显?微?镜?检?查、分?离?培?养,以?及 PCR?检测的技术要求、综合判定及鉴别诊断. 本文件适用于猪痢疾的诊断.本文件所规定的粪便中猪痢疾短螺旋体显微镜检查不适用于急性病例 后期、慢性及投药后病例. ２　规范性引用文件 下?列?文?件?中?的?内?容?通?过?文?中?的?规?范?性?引?用?而?构?成?本?文?件?必?不?可?少?的?条?款?,其?中?,注?日?期?的?引?用?文 件?,仅?该?日?期?对?应?的?版?本?适?用?于?本?文?件?;不?注?日?期?的?引?用?文?件?,其?最?新?版?本(包?括?所?有?的?修?改?单?)适?用?于 本文件?. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB１９４８９　实验室生物安全通用要求 GB/T２７４０１　实验室质量控制规范　动物检疫 NY/T５４１　兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 SN/T１２０７　猪痢疾检疫技术规范 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３??１　 猪痢疾　swinedysentery BB曾称为猪密螺旋体?痢?疾、血?痢、黏?液?出?血?性?腹?泻?或?弧?菌?性?痢?疾,是?由?猪?痢?疾?短?螺?旋?体?(rachyspira B B hyodysenteriae,??h)引起猪的一种严重的肠道传染病.其特征是黏液性或黏液出血性腹泻,大?肠?黏?膜?发 生卡他性出血性炎症,有的发展为纤维素性坏死性炎症. ３??２　 i猪痢疾短螺旋体?Brachyspiahyodysenterae i 猪痢疾短螺旋体是猪痢疾的病原,存在于猪的病变肠段黏膜、肠内?容?物?及?粪?便?中,对?外?界?环?境?有?较?强 的抵抗力,过去常称为猪痢疾密螺旋体或猪痢疾蛇形螺旋体. ３??３　 s c?ig投药后病例　di s c?ig 已被投喂泰乐菌素、杆菌肽等对猪痢疾短螺旋体敏感的药物的猪只. ３??４　 聚合酶链式反应　polymerasechainreacton d i li ii li i用于扩增位于两端已知序列之间?DNA(eoxyrbonucecac d i li i i l i i 过高温变性成单链,在?DNA?聚?合?酶?和?适?宜?的?温?度?下,两?条?互?不?相?补?的?寡?核?苷?酸?片?段?即?引?物?分?别?与?模?板 DNA?两条链上的一段互补序列发生退?火,接?着?在?DNA?聚?合?酶?的?催?化?下?以?４?种?dNTP(eoxyrbonuceoＧ sdetrphosphate,脱氧核苷三磷酸)为底物,使退火引物得以延伸,如此反复变?性、退?火?和?DNA?合?成?这?一 循环,使位于两端已知序列之间的?DNA?片段呈几何倍数扩增,经２５个~３０个扩增循环,扩增倍数达到约 ６１０?. ６ １ NY/T?５４５—２０２３ ４　缩略语 下列缩略语适用于本文件. i li iDNA:脱氧核糖核酸(Deoxyr i li i i l???i ic?i i l???i i c?i l???i NADH:还原型辅酶Ⅰ(Niotnamideadeninedinuceotde) nox:NADH?氧化酶(NADHoxidase) P iP i iS P i P i i S PCR:聚合酶链式反应(olymerasechanreacton) SD:猪痢疾(wineDysentery) i i ＧTiTAE:Trs乙酸盐?EDTA?缓冲液 i i Ｇ T i Taq?酶:DNA?聚合酶(aqDNApolymerase) TSA:胰蛋白胨大豆琼脂(TryptcaseSoyAgar) ５　生物安全要求 样品采集、处理?及?检?测?过?程?中?涉?及?的?实?验?操?作?应?符?合?GB１９４８９、GB/T２７４０１、NY/T５４１、SN/T １２０７的相关规定. ６　临床诊断 ６??１　流行病学 ６??１??１　猪痢疾在自然流行中只发生?于?猪.?各?种?年?龄、品?种、性?别?的?猪?均?易?感,但?保?育?后?期?至?育?肥?前?期?猪 １(??５月龄~４月龄)发生较多,而哺乳仔猪、成年猪发病率低. １ ６??１??２　本病主要通过粪便污染而经消化道感染.阴雨潮湿、气候多变?等?各?种?应?激?因?素,均?可?促?进?本?病?的 发生. ６??１??３　本病无明显季节性,流行经过比较缓慢,持续期较长,多数病猪转为慢性,康复后(自然康复或治疗 后)可复发或多次复发,很难根除. ６??２　临诊症状 ６??２??１　潜伏期 ２d至２个月不等,自然感染一般为１周~２周. ６??２??２　临