NY_T 540-2023 鸡病毒性关节炎诊断技术.docxVIP

NY/T?５４０—２０２３ 鸡病毒性关节炎诊断技术 １　范围 本文件规定了鸡病毒性关节炎的临床诊断、病毒分离与鉴定、反转?录Ｇ聚?合?酶?链?式?反?应(RTＧPCR)、实 i时荧光?RTＧPCR(RealtmeRTＧPCR)和间接?ELISA?抗体检测方法的技术要求. i 本文件适用于鸡病毒性关节炎的诊断、检疫、检测、监测和流行病学调查等. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB１９４８９　实验室生物安全通用要求 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３??１　 r t?ii鸡病毒性关节炎　 r t?ii 由禽呼肠孤病毒感染引起的鸡或火鸡的一种重要传染病. ４　缩略语 下列缩略语适用于本文件. a rARV:禽呼肠孤病毒(Avi a r c aCEF:鸡胚成纤维细胞(ChikenEmbryonicF c a CPE:细胞病变效应(CytopathicEfect) ELISA:酶联免疫吸附试验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay) e’eMEM:基础?Eagl?培养基 e’e P iPBS:磷酸盐缓冲液(hosphateBuf P i i?i i iRTＧPCR:反转录Ｇ i?i i i Ｇi Ｇi i?iRealtmeRTＧPCR:实时荧光?反?转?录?聚?合?酶?链?式?反 Ｇi Ｇi i?i i iCha i i S iiSPF:无特定病原(pec S ii i Ｇ i iTAE:三?羟?甲?基?氨?基?甲?烷Ｇ乙?酸Ｇ乙?二?胺?四?乙? i Ｇ i i a ienediminetetraAcetcAc a i ３３?５５Ｇ ３３?５５Ｇ Ｇ iTMB:,′,, ３３?５５Ｇ ３３?５５Ｇ Ｇ i ５　临床诊断 ５??１　流行病学 ５??１??１　该病一年四季均可发生. ５??１??２　不同品种的鸡均可感染,但肉用型或肉蛋兼用型等体型较大的鸡多发. ５??１??３　不同日龄的鸡均可感染. ５??１??４　发病率高,死亡率较低,日龄?越?小?越?易?感.?雏?鸡?感?染?后,发?病?率?和?死?亡?率?显?著?高?于?青?年?鸡?和?成?年 １ NY/T?５４０—２０２３ 鸡.日龄大的鸡感染后潜伏期较长,有的可耐过. ５??１??５　该病可垂直传播,也可水平传播. ５??２　临床症状 ５??２??１　病鸡精神沉郁,食欲减退,卧地倦动. ５??２??２　跗关节肿胀,腿变形,站立困难,跛行或单腿跳跃,严重病例瘫痪. ５??２??３　生长停滞、贫血、消瘦,日龄小的严重病例可逐渐衰竭死亡. ５??３　病理变化 ５??３??１　剖检变化 ５??３??１??１　跗关节和跖关节的剑鞘水肿,病鸡关节腔内有淡黄或淡红色?渗?出?液,病?程?后?期?逐?渐?形?成?纤?维?素 性渗出. ５??３??１??２　腿骨质脆,易折断. ５??３??１??３　肌腱断裂. ５??３??２　组织学病变 ５??３??２??１　在急性期,出现水肿、凝固性坏死,异嗜细胞集聚血管周围浸润,网状细胞增生,最后引起腱鞘壁 层明显增厚,滑膜腔充满异嗜细胞和脱落的滑膜细胞,随着破骨细胞增生而形成骨膜炎. ５??３??２??２　在慢性期,滑膜形成绒毛样突起,并有淋巴样结节,大量纤维组织增生,明显见到网状细胞、淋巴 细胞、巨噬细胞和浆细胞的浸润或增生.趾关节和跗关节区也出现相同的一般炎症反应. ５??４　结果判定 当鸡符合５??１且符合５??２、??３之一的,可判定为疑似鸡病毒性关节炎. ６　样品采集和处理 ６??１　器材 ６??１??１　手术剪刀和镊子. ６??１??２　离心管. ６??１??３　样品保存管. ６??１??４　组织匀浆器. ６??１??５　采血器. ６??１??６　滤器(孔径０??２２μm). ６??２　试剂 ４４６??２??１　０??０１?mol/LpH７??２PBS,配方应符合附录?A?中?A??１的规定. ４ ４ ６??２??２　青霉素(?０００IU/mL). ６??２??３　链霉素(?μg/mL). ６??３　样品采集 ６??３??１　生物安全措施 实验室生物安全措施按照?GB１９４８９的规定执行. ６??３??２　组织病料采集 ６??３??２??１　活禽采样:灭?菌?棉?拭?子?插?入?泄?殖?腔?旋?转?２?圈?~３?圈?后,放?入?含?青?霉?素?４０００IU/mL?和?链?霉?素 ４μg/mL的无菌?PBS样品保存管中. ６??３??２??２　病死禽采样:无菌采取肝脏、脾脏、肾脏等组织